Качественный анализ. 3.1.1.1. Реакция с сульфаниловой кислотой и β-нафтолом

3.1.1.1. Реакция с сульфаниловой кислотой и β-нафтолом. Выполнение реакции. В углублении на капельной пластинке или в маленькую пробирку вносят 1—2 капли нейтрализованного диализата, прибавляют 2—3 капли 0,5 %-го раствора сульфаниловой кислоты в 2 %-й соляной кислоте. После перемешивания этих жидкостей через 3—5 мин прибавляют каплю щелочного раствора β-нафтола.

Оценка результатов. При наличии нитритов в исследуемом растворе появляется интенсивная оранжево-красная окраска. Интенсивность окраски зависит от содержания нитритов в пробе.

Приготовление щелочного раствора β-Нафтола (раствор). В 40 мл 10 %-го раствора гидроксида натрия растворяют 2 г β-нафтола и прибавляют воду до 100 мл. Этот раствор используют свежеприготовленным.

3.1.1.2.Реакция с реактивом Грисса. Выполнение реакции. В углубление на капельной пластинке или в маленькую пробирку вносят несколько капель нейтрализованного диализата, а затем прибавляют 3—4 капли реактива Грисса.

Оценка результатов. При наличии нитритов в водной вытяжке сразу или спустя некоторое время появляется интенсивная красная окраска. Интенсивность окраски зависит от количества нитритов в пробе.

Приготовление реактива Грисса Для получения этого реактива готовят 2 раствора: 1 % раствор сульфаниловой кислоты в 30 % растворе уксусной кислоты (раствор А) и 0,1 % раствор α-нафтиламина в 30 % растворе уксусной кислоты (раствор Б). Перед употреблением смешивают равные объемы растворов А и Б.

Примечание. Если при реакции с сульфаниловой кислотой и с реактивом Грисса появляется слабоинтенсивная окраска, то возникает вопрос о возможном появлении окрасок не за счет нитритов, вызвавших отравление, а за счет наличия их в окружающей среде. Б этих случаях проводят отгонку нитритов из диализатов в токе оксида углерода (IV).

Часть подлежащего исследованию диализата вносят в колбу вместимостью 50 мл и подкисляют уксусной кислотой, которая из нитритов вытесняет азотистую кислоту и не вытесняет азотную кислоту из нитратов. После подкисления диализата из аппарата Киппа через колбу пропускают ток оксида углерода (IV), который переносит азотистую кислоту или ее ангидрид в приемник, содержащий 1 % раствор гидроксида натрия.

После отгонки азотистой кислоты содержимое приемника нейтрализуют 10 %-м раствором соляной или уксусной кислоты (не допуская избытка этих кислот), а затем в нейтрализованном дистилляте определяют наличие нитритов при помощи описанных выше реакций с реактивом Грисса, с сульфаниловой кислотой и β-нафтолом, а также с помощью реакции окрашивания йод-крахмальной бумажки.

3.1.1.3. Обнаружение нитритов с помощью йод-крахмальной бумажки. На йод-крахмальную бумажку наносят каплю 1 %-го раствора соляной кислоты и 3—4 капли нейтрализованного дистиллята. При наличии нитритов в дистилляте йод-крахмальная бумажка синеет.

Приготовление йод-крахмальной бумажки (см. п. 1.3.3.1.).

Оценка результатов. При положительных реакциях дистиллята с сульфаниловой кислотой, реактивом Грисса и йод-крахмальной бумажкой делают вывод о наличии нитритов в биологическом материале.

Для решения вопроса о составе нитритов, обнаруженных при помощи указанных выше реакций, производят реакции на катионы натрия и калия. С этой целью берут диализат и поступают так, как указано выше (см. п.2.3.2. и 2.2.1.2.).