Ход работы. Министерство образования и науки Российской Федерации

Министерство образования и науки Российской Федерации

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение

Высшего профессионального образования

«Уфимский государственный нефтяной технический университет»

Кафедра «Биохимии и технологии микробиологических производств»

Отчет принят:

Оценка__________

доцент кафедры БТМП

_______ Скорняков А.Н.

Отчет

о лабораторной работе № 3

на тему «Изучение ферментов и кинетики ферментативных

реакции»

Студент гр. БТБ-12-02 А.Г. Никитина

Уфа

Цель работы: сравнительное действие ферментов и небиологических катализаторов.

Метод основан на изучении скорости гидролиза крахмала, определяемого по убыли субстрата (крахмал) в реакции с раствором иода или по приросту продукта (мальтоза), выделяемого реакцией Фелинга (образование красного осадка оксида меди).

Реагентом на крахмал и декстрины служит йод, образующий с ним окра­шенные комплексные соединения (см. таблицу 1). Амилоза крахмала при этом дает с йодом комплекс синего цвета, гликоген - красно-бурого, а декстрины в зависимости от молекулярной массы окрашиваются в красно-бурый или желто­ватый цвет. Последний обусловлен не образованием комплекса, а находящимся в среде йодом.

Таблица 1- Проба с йодом на крахмал и продукты его гидролиза

Крахмал и продукты его гидролиза	Окрашивание с йодом
Крахмал	Синее
Амилодекстрины	Фиолетовое
Эритродекстрины	Красное
Ахро декстрины	Желтое (окраска раствора йода) или бесцветное!
Мальтодекстрины	Желтое (окраска раствора йода) или бесцветное
Мальтоза	Желтое (окраска раствора йода) или бесцветное |

Мальтоза, как восстанавливающий дисахарид, выявляется реакцией Фелинга, которая основана на способности углеводов в щелочной среде восста­навливать ион Си²⁺, содержащийся в жидкости Фелинга в виде комплексного соединения с тартратами, до оксида меди красного цвета, выпадающего в оса­док.

Чем выше скорость катализа, тем быстрее исчезает (положительная йод- крахмальная проба) синее окрашивание и усиливается реакция Фелинга на мальтозу.

Реактивы: 1%-ный свежеприготовленный раствор крахмала в 0,3%-ном растворе хлорида натрия; раствор йода в иодиде калия; реактив Фелинга; 10% раствор НС1.

Материал для исследования: разбавленная слюна. Для ее получения про­мывают рот водой от остатков пищи. Набирают в рот порцию дистиллирован­ной воды около 20 мл и держат ее примерно 2 мин, смешивая языком со слю­ной. Жидкость со слюной выпускают в стаканчик и профильтровывают через вату в пробирку.

Фильтрат используют для работы.

Ход работы

Берут три пробирки; в первую вносят 1 мл воды, во вторую - 1 мл рас­твора соляной кислоты, в третью - 1 мл разбавленной слюны. Добавляют во все пробы 5 мл раствора крахмала, перемешивают их стеклянной палочкой и ставят первую и третью пробирки на водяную баню при температуре 38 °С, а вторую - в кипящую баню. Через 15 мин пробирки охлаждают. Из каждой пробирки от­бирают по 5 капель в другие пробирки, добавляют 1...2 капли раствора йода и сравнивают окрашивание проб.

Для определения мальтозы отбирают по 3 мл из каждой пробирки, при­бавляют по 1 мл реактива Фелинга и нагревают верхний слой смеси до кипения. Отмечают появление в пробах красного осадка оксида меди (I).

Вывод: Реагентом на крахмал и декстрины служит йод. Амилоза крахмала при этом дает с йодом комплекс синего цвета, гликоген - красно-бурого, а декстрины в зависимости от молекулярной массы окрашиваются в красно-бурый или желто­ватый цвет. Последний обусловлен не образованием комплекса, а находящимся в среде йодом.