Разводят исходную разбавленную слюну водой в пробирках в 10, 20, 50, 100 раз. Берут четыре пробирки и вносят в каждую 1 мл одного из полученных разведений слюны. В пробирки из бюретки добавляют по 4 мл раствора крахмала, быстро помещают их в водяную баню при температуре 38 °С и засекают время начала реакции.
Через каждые 1-2 мин отбирают по 2 капли жидкости из каждой пробы и приливают к ним по 1 капле раствора йода в иодиде калия. Вначале пробы дают синее, затем красно-фиолетовое и, наконец, красное окрашивание.
Отмечают с точностью до 0,5 мин время от начала опыта до появления в каждой из четырех пробирок красного окрашивания - стадия образования эритродекстринов из крахмала.
Оформление работы: результаты изобразить графически, откладывая по оси ординат V - скорость реакции (величина, обратная времени образования эритродекстринов), а по оси абсцисс С - относительную концентрацию амилазы (разведение). Сделать вывод о зависимости скорости реакции от концентрации фермента и сравнить с той же зависимостью для небиологических катализаторов.
|
|
Зависимость скорости ферментативной реакции от температуры
Метод основан на определении скорости гидролиза а-амилазой слюны крахмала в зависимости от температуры.
Ход работы
В пять пробирок отмеривают по 10 капель растворов фосфатно- щтратного буфера со следующими значениями pH: 5,6; 6,4; 6,8; 7,2; 8,0. Прибавляют во все пробы по 5 капель разведенной в 10 раз слюны и по 10 капель раствора крахмала и ставят пробирки на водяную баню при температуре 38 °С. 1ерез 1-2 мин отбирают по 1 капле исследуемого раствора и капают на 1 каплю раствора йода в иодиде калия. Отмечают время (стадия образования эритродектринов) в каждой из пяти проб.
Фермент | Субстрат | Окрашивание йодом | Температура, ▫С | Окрашивание после нагревания |
Вода | крахмал | Темно-зеленый | Сине-фиолетовый, красный осадок | |
Слюна | крахмал | желтый | Коричнево-оранжевый, красный осадок | |
HCl | крахмал | коричневый | Оранжевый, красный осадок |
Вывод: Была изучена кинетика ферментативных реакций. Использование методов качественного анализа субстратов и продуктов реакции позволили выявить присутствие фермента в биологическом материале.