Методы исследования белкового обмена

Используя знания о свойствах белков и пептидов можно применять различные методы определения белков и пептидов в биологических жидкостях. В практике используют следующие методы определения:

1. Электрофоретические – основаны на разделении белков в постоянном электрическом поле в зависимости от величины белковой молекулы.

2. Ультрацентрифугирование – основано на различной скорости седиментации отдельных белков в зависимости от их молекулярной массы.

3. Хроматографические:

· Ионнообменная хроматография основана на различной способности отдельных белков к обмену с ионами ионообменных смол,

· На молекулярных ситах (гельфильтрация) – на сефадексах – белки разделяются в зависимости от величины молекулы,

· Аффинная хроматография – белки делятся на индивидуальные в зависимости от сродства к аффинату (наполнителю колонок).

4. Высаливание – чаще с помощью сернокислого аммония – основано на снятии заряда и водной оболочки различными концентрациями солей. Это старый метод разделения белков.

5. Аминокислотный состав белков и пептидов после гидролиза определяют в аминокислотном анализаторе.

6. Определение количества белка по белковому азоту – пробу сжигают в присутствии серной кислоты и перекиси водорода (окислитель), при этом происходит минерализация белка в виде сульфата аммония, количество которого потом определяют реактивом Несслера.

7. Использование цветных реакций – например биуретовая на общий белок, ксантопротеиновая на циклические аминокислоты и т.д. интенсивность окраски измеряют колориметрически.

8. Иммунологические методы – используют для количественного определения индивидуальных белков. При взаимодействии со специфической антисывороткой образуется мутный раствор, интенсивность помутнения измеряют колориметрически.