с методами клинико-биохимических исследований»

ГОУ СПО Медицинский колледж №1

Эталоны

«Основы биохимии

с методами клинико-биохимических исследований»

1 вариант

Факультет «Лабораторная диагностика» базовый уровень образования

Специальность «Медицинский лабораторный техник» 060110 – 51

Москва 2011

Эталоны ответов к билету №1.

1. Изоферменты – это ферменты, которые имеют в составе молекулы одинаковые активные центры и катализирующие одну и ту же реакцию, но разные носители (белковые компоненты – апоферменты), отличающиеся длинной полипептидной цепи, молекулярной массой, оптическими свойствами, локализацией и скоростью катализируемой реакции.

Другое название изоферментов – изоформы. Изоформы имеют: креатинкиназа, фосфатаза, амилаза и некоторые другие ферменты.

2. Гормоны – биологически активные вещества, принадлежащие к различным химическим группам и влияющие на различные физиологические процессы в организме: морфогенез, репродукцию, обмен веществ и энергии. Гормоны обладают следующими свойствами:

• Дистантный характер действия – большинство гормонов проявляют свою активность не в тех клетках, где они синтезируются, а в клетках-мишенях (например, адреналин синтезируется в мозговом веществе надпочечников, а регулирует углеводный обмен в печени, мышцах и др. органах)
• Высокая биологическая активность – даже в небольших количествах гормоны спасобны вызвать характерный эффект.
• Специфичность действия – каждый гормон обладает своим собственным механизмом действия, отличным от других гормонов, например, инсулин увеличивает проницаемость клеточных мембран для глюкозы, поступающей в клетку; адреналин увеличивает единовременный выброс глюкозы, за счет чего возрастает сила мышц.

3. ЛДГ (лактатдегидрогеназа) катализирует превращение пирувата в лактат, при этом НАDH превращается в НАD+, концентрация которого при использовании с/ф 340 нм максимально отличается от концентрации НАDH. Оптическая плотность уменьшается в конце реакции в сравнении с началом реакции.

Эталоны ответов к билету №2.

1. Гемостаз – сохранение постоянства всех характеристик крови. Для этого в крови имеются системы, состоящие из факторов (химических соединений), которые выполняют характерные функции. Наиболее важные системы – это свертывающая система, противосвертывающая система и система фибринолиза.

· Свертывающая система – предотвращает кровотечение при повреждении кровеносных сосудов.

· Противосвертывающая сиситема – препятствует свертыванию крови в неповрежденных кровеносных сосудах.

· Система фибринолиза растворяет тромб в сосудах, если заживление прошло успешно или тромбообразование произошло в неповрежденных сосудах.

2. Хроматография – аналитический метод, позволяющий разделить различные соединения, находящиеся в растворе вместе, выделить их путем окрашивания или другим способом и определить количество выделенного вещества.

В процессе проведения хроматографии получается картинка с окрашенными пятнами разделенных веществ, называемая хроматограммой.

3. Реакция идет в три стадии:

кк

- Креатин - фосфат + АДФ → Креатин + АТФ

ГК

- АТФ + Глюкоз → Глюкозо-6-Ф + АДФ

Г-6-ФДГ

- Глюкозо-6-Ф + НАДФ → Глюконат-6-Ф + НАДФН + Н⁺

Эталоны ответов к билету №3.

1. Витамины разделяют на две группы:

· Жирорастворимые – усваиваются только в присутствии животных или растительных жиров, в которых растворяются. В организм поступают с животной пищей или в виде лекарственных препаратов.

· Водорастворимые – усваиваются в водном растворе. В организм поступают с растительной и животной пищей.

Биологическая роль витаминов заключается в том, что они или их производные образуют ко-ферменты различных ферментов, обеспечивая их активность и специфичность действия.

2. В щитовидной железе синтезируются из аминокислоты тирозина:

· Тироксин – тетрайодтиронин – синтез на молекуле α₂-глобулина, медленное проникновение в клетку, длительный латентный период, пролонгированное действие

· Трийодтиронин – синтез на белках плазмы, быстрое проникновение, короткий латентый период, быстродействие

Гормоны щитовидной железы влияют на рост клеток и всего организма, обмен веществ, адаптацию, воспроизведение.

3. Кислая фосфатаза (КФ) расщепляет фосфорилированный субстрат с образованием пиррофосфата и промежуточного соединения, которое взаимодействует с хромогенным реагентом. В процессе реакции хромогенный реагент превращается в продукт красного цвета. Интесивность окраски прямо пропорциональна активности КФ.

Эталоны ответов к билету №4.

1. Глюкокортикоиды – гормоны, которые синтезируются в коре надпочечников. Они регулируют глюконеогенез – процесс синтеза углеводов из не углеводных компонентов. Основные не углеводные компоненты – это:

· Глицерол – трехатомный спирт

· Пируват – анион пировиноградной кислоты

· Лактат – анион молочной кислоты

· Гликогенные аминокислоты, например, глицин, аланин и др.

2. Все методы оценки гемостаза делятся на три группы:

· Клоттинговые - основаны на определении времени свертывания плазмы (например, АЧТВ, ПВ, ТВ, фибриноген по методу Клауса) или растворения свертка фибрина (например, ФАК)

· Хромогенные – позволяют определить активность факторов по действию их на хромогенные субстраты, которые в процессе реакции освобождаются и окрашивают раствор. Окрашенный раствор фотометрируют

· Иммунологические – основаны на взаимодействии факторов, которые являются по своей химической природе белками, с антителами на эти белки. Антитела получают иммунизацией подопытных животных, чаще – коз. Полученные антитела очищают и используют. Наиболее интересным методом является ИФА (иммуноферментный анализ).

3. ЛДГ (лактатдегидрогеназа) катализирует превращение пирувата в лактат. При этом НАDH отдает протон пирувату, превращаясь в НАD⁺. При λ= 340 нм наблюдается максимальная разница между НАDН и НАD⁺. Экстинкция при этом уменьшается.

Эталоны ответов к билету №5.

1. Существует две достаточно известные классификации гормонов:

· По химической природе – белки (например, инсулин), полипептиды (например, глюкагон), производные аминокислот (например, тироксин, который синтезируется из аминокислоты тирозина)

· По месту синтеза – все гормоны синтезируются в железах внутренней или смешанной секреции: гормоны гипофиза (передняя доля- СТГ, ТТГ, АКТГ, ГТГ; средняя доля – МТГ; задняя доля – окситоцин, вазопрессин); гормноны щитовидной железы – тироксин, трийодтиронин; гормоны паращитовидных желез – кальцитонин, кальцитриол, паратгормон; гормоны тимуса – тимазин; гормоны панкреаса – α – клетки островков лангерганса: глюкогон и β – клетки островков Лангерганса: инсулин; гормоны половых желез: яичников – эстрогены (например, эстрол, эстрадиол, эстриол и др.) и прогестины – прогестерон; яичек: андрогены – андростерон и тестостерон.

2. Каскад – это процесс последовательной активации факторов внутреннего механизма свертывания, при котором сначала методом контактной активации активируется XII фактор, а он уже запускает поэтапный процесс, при котором каждый предыдущий активный фактор активирует последующий фактор, который в свою очередь активирует следующий фактор, и так до образования свертка. Всего плазменных факторов двенадцать, поэтому каскад растянут во времени.

3. Амилаза расщепляет синтетический гликозидный субстрат с хромогеном (нитрофенил), при этом хромоген освобождается и окрашивает пробу. Экстинкция увеличивается с течением времени. Скорость нарастания экстинкции прямо пропорциональна активности амилазы.

Эталоны ответов к билету №6.

1. Адсорбция – формирование связей между сорбентом и компонентом смеси. Десорбция – разрушение образовавшихся связей и освобождение вещества.

Сорбент – это твердое вещество, которое обладает способностью удерживать на своей поверхности различные молекулы. Адсорбция может быть специфической и не специфической (см. табл.)

Адсорбция
Специфическая	Не специфическая
Вещества из смеси сорбируются	Любые вещества из смеси
избирательно	сорбируются

Сорбенты необходимы для присоединения и разделения веществ в смесях, а так же для разделения различных веществ, находящихся в одной смеси.

В качестве сорбентов могут быть использованы следующие материалы:

· Хроматографическая бумага

· Целлюлоза

· Гели на основе декстрана

· Агароза

· Полиакриламидных гель

· Полистирольные смолы

· Полиамидные смолы

· Кизельгур

· Силикогель

2. Биологический материал после работы с ним должен быть помещен в емкость с дезинфицирующим раствором на 30-60 минут. Флаконы или пробирки (пустые) из – под биоматериала должны быть погружены в другую емкость с дезинфицирующим раствором на 30-60 минут.

3. Реакция идет в две стадии:

АLТ

- 2-Оксоглутарат + L -Аланин → Глутамат + Пируват

LDH

- Пируват + НАДН + Н⁺ → L - лактат + НАД⁺

Эталоны ответов к билету №7.

1. Хроматографические методы исследования классифицируются на две группы:

А) по механизму разделения – адсобционная, ионо-обменная, диффузионная, гель-фильтрационная, распределительная, аффинная.

Б) по способу проведения – колоночная, тонко-слойная.

2. Гормоны – физиологически активные вещества, которые синтезируются железами внутренней или смешанной секреции.

Гормоны диффундируют непосредственно из железистой клетки в капилляры через клеточную мембрану и эндотелий стенок капилляров. Гормоны регулируют в организме следующие функции:

· морфогенез

· адаптацию

· репродукцию

· обмен веществ (белков, жиров, углеводов).

3. Реакция идет в две стадии:

АLТ

- 2-Оксоглутарат + L -Аланин → Глутамат + Пируват

LDH

- Пируват + НАДН + Н⁺ → L - лактат + НАД⁺

Эталоны ответов к билету №8.

1. Распределительная хроматография основана на распределении веществ, находящихся в смеси, между двумя жидкими фазами: подвижной и неподвижной, которые не смешиваются. Твердая фаза служит матрицей для стационарной фазы. Это может быть фильтровальная бумага, специальная хроматографическая бумага, тонкий слой сорбента на носителе. Вода удерживается порами носителя и фиксируется, а подвижная фаза – органический растворитель – продолжает двигаться, увлекая за собой растворенный в ней компонент смеси. Различные вещества многократно перераспределяются между неподвижной (вода) и подвижной (органический растворитель) фазами по длине носителя с различной скоростью в соответствие с коэффициентом их растворимости.

Распределительная хроматография может быть классифицирована по способу проведения:

· Радиальная – движение растворителя и веществ смеси происходит из центра носителя по радиусу к периферии

· Восходящая – движение растворителя и веществ смеси происходит снизу вверх по носителю

· Нисходящая - движение растворителя и веществ смеси происходит сверху вниз по носителю

2. Гормоны оказывают влияние на обмен:

А) белков – СТГ стимулирует синтез костных и мышечных белков

Б) жиров – инсулин стимулирует синтез жиров в клетках и жировой ткани.

В) углеводов – адреналин увеличивает силу мышечных сокращений за счет распада гликогена и быстрого окисления глюкозы; глюкогон способствует распаду гликогена и выходу глюкозы в кровь; инсулин стимулирует усвоение глюкозы клетками, активирует фосфоглюкомутазу, превращающую глюкозо-1-фосфат в глюкозо-6-фосфат, и способствует синтезу гликогена в печени и мышцах; глюкокортикоиды стимулирует глюконеогенез – синтез углеводов из не углеводных продуктов.

3. Реакция идет в две стадии:

GOТ

-2-Оксоглутарат + L – Аспартат → Глутамат + Оксалацетат

MDH

- Оксалацетат + НАДН + Н⁺ → Малат + НАД⁺

Эталоны ответов к билету №9.

1. Ионо-обменная хроматографияоснована на разделении веществ, обладающих различными суммарными зарядами имеющихся в молекуле активных (ионизированных) групп атомов в данных условиях разделения: рН, солевая концентрация.

Проводится ионо-обменная хроматография на колонках, содержащих ионно-обменные смолы. Ионообменники представляют собой сухие вещества, которые проявляют активность будучи насыщены водой при замачивании в ней.

Разные ионообменники обладают различными свойствами (см.табл.)

Таблица №5. Ионообменники.

Название	Состав	Функция
Анионообменники	Ионогенные группы «+»	Связывают анионы «-»
Катионообменники	Ионогенные группы «-»	Связывают катионы «+»

В качестве ионообменников применяются:

· целлюлоза

· диэтиламиноэтилцеллюлоза

2. Внешний механизм свертывания активируется серьезным повреждением ткани, при котором в кровь попадает тканевой тромбопластин. Присутствие тканевого тромбопластина активирует VII фактор, минуя факторы каскада. Активный VII фактор в комплексе с V фактором активируют Х фактор гораздо быстрее, чем это происходит при внутреннем механизме свертывания, а активный Х фактор превращает протромбин в тромбин, который превращает фибриноген в фибрин.

γ-ГТ

3. L-γ-глутамил-3-карбокси-4-нитроанилид + Глицилглицин →

L-γ- глутамилглицилглицин + нитроанилин (свободный)

Интенсивность окраски прямо пропорционально активности гаммаглутамилтранспептидазы.

Эталоны ответов к билету №10.

1. Колоночнаяхроматография – это вид хроматографии, при проведении которой сорбент помещают в колонку. Разделение может проводиться двумя способами:

· под обычным давлением – это медленный процесс, который может длиться очень долго (от получаса до нескольких часов)

· под высоким давлением – это значительно быстрее (до получаса и менее)

Колоночная хроматография очень часто ассоциируется с гель-фильтрацией, т.к. последнюю удобнее проводить именно в колонке.

Гель-фильтрация - это фракционирование смеси веществ по размерам молекул путем прохождения их через гели с определенной величиной пор (метод молекулярного сита).

Разные размеры молекул различных веществ влияют на скорость прохождения веществ через колонку. Разные соединения не одновременно выходят из колонки, заполненной сефадексом.

Более крупные молекулы являются и более тяжелыми, поэтому они быстрее передвигаются в вертикальной колонке и, соответственно, раньше выходят из колонки в составе водного или другого раствора в подставленную для сбора посуду. Менее крупные молекулы и низкомолекулярные соединения передвигаются медленнее, т.к. на них в меньшей степени действует сила тяжести. Они выходят из колонки позже и тоже могут быть собраны в посуду.

2. Общий путь свертывания начинается с активации протромбина в тромбин, не зависимо от того, какой механизм свертывания ему предшествовал: внутренний или внешний. Тромбин активирует превращение фибриногена в фибрин путем отщепления от α –цепей и β-цепей фибриногена сигнальных пептидов А и В соответственно. После отщепления пептидов образуются «липкие концы», которыми молекулы фибриногена соединяются друг с другом, образуя фибрин-мономер. После этого ХIII фактор, который является белковой полимеразой, образует поперечные «сшивки» между молекулами фибрин-мономера с образованием фибрин-полимера, имеющего вид сетки; сетка уплотняется за счет оседания в ней форменных элементов крови.

3. Реакция идет в две стадии:

ЩФ

- р-нитрофенилфосфат → р-нитрофенол + фосфат

периодат натрия

- Фенол + 4-аминофенозон → желтое окрашивание.

Интенсивность окраски пропорциональна активности ЩФ (щелочной фосфатазы).

Эталоны ответов к билету №11.

1. Гель-фильтрация – это фракционирование смеси веществ по размерам молекулы путем пропускания их через другое вещество, между молекулами которого имеются отверстия (поры) определенной величины (метод молекулярных сит).

В качестве молекулярных сит могут быть использованы следующие соединения:

· биогель

· гель агарозы

· сефадекс

Чем больше поры в молекулярных ситах, тем больше по размеру молекулы могут через них пройти. Для низкомолекулярных соединений используют сефадексы с малым размером пор, для белков – с большим (ударение на первом слоге) размером пор. Иногда в смеси могут находиться как низкомолекулярные соединения, так и белки.

2. Противосвертывание (антикоагуляция) – процесс, направленный на инактивацию факторов свертывания в сосудистом русле. Роль противосвертывания – предотвращение свертывания крови в неповрежденных сосудах. Факторы противосвертывания – антикоагулянты. Известно несколько классификаций антикоагулянтов. Наиболее часто применимы следующие:

· прямые и не прямые антикоагулянты – по действию.

· физиологические и не физиологические – по месту синтеза.

Действие прямых антикоагулянтов направлено на тромбин. Не прямые антикоагулянты инактивируют любые факторы свертывания. Физиологические антикоагулянты синтезируются в организме, не физиологические – обычные соединения, которые могут относиться к разным группам веществ, но обладающие антикоагулянтным действием.

3. АЧТВ – активированное частичное тромбопластиновое время – клоттинговый тест, применяемый для изучения внутреннего механизма свертывания. При добавлении к плазме триггерного (пускового) вещества, имитирующего факт ранения капилляра, фосфолипидов – субстрата, на котором происходит свертывание, и ионизированного кальция, который способствует активированию факторов свертывания, процесс свертывания будет зависеть от всего комплекса факторов каскада, содержащихся в исследуемой плазме.

Эталоны ответов к билету №12.

1. Фаза – это специфическая среда, в которой находится разделяемое от других соединений вещество. Система, используемая при проведении хроматографических исследований, является двух фазной. Между этими фазами распределяются разделяемые вещества.

Различают фазы по нескольким критериям (см. табл.)

Таблица. Классификация хроматографических фаз.

Хроматографическая фаза
Неподвижная	Подвижная
твердая	жидкая	смесь	жидкая	Газообразная
		органический	течет	пропускается
носитель	растворитель	растворитель	по	через
		вода	неподвижной	неподвижную

Хроматография – это процесс распределения веществ в системе двух фаз. При этом твердая фаза является носителем, а смесь представлена органическим растворителем и водой. Органический растворитель является подвижной фазой, вода – неподвижной.

Твердая фаза всегда неподвижна. Она является той основой, по которой движется смесь подвижной и неподвижной фаз. При этом та фаза, которая движется медленнее, считается неподвижной, а та, что движется быстрее – подвижной относительно неподвижной фазы.

2. Витамины и их производные играют очень большую физиологическую роль в обмене веществ в организме, так как образуют ко – ферменты различных ферментов, которые так же называются ко – фактороами. Например, витамин В₆ – пиридоксин, фосфорилируясь, превращается в фосфопиридоксаль, или пиридоксальфосфат, который является ко - фактором аминотрансферраз (трансаминаз) – АлТ, АсТ.

3. ТВ – тромбиновое время – клоттиноговый тест, предназначенный для изучения внешнего механизма свертывания. При добавлении к исследуемой плазме тромбопластина, имитирующего ранение стенки капилляра, и ионизированного кальция, активирующего факторы свертывания, время свертывания будет зависеть только от активности VII, X, II (тромбина) и I (фибриногена) факторов свертывания.

Эталоны ответов к билету №13.

1. Ионизированный кальций – IV плазменный фактор – способствует правильному сближению плазменных факторов свертывания, необходимому для того, чтобы они встретились, и их правильной ориентации друг относительно друга таким образом, чтобы активные центры реагирующих факторов могли соединиться и взаимодействовать друг с другом.

2. Хроматографические фазы делятся на твердую, жидкую и газообразную. В качестве твердой фазы могут быть использованы следующие компоненты: хроматографическая бумага, пластины из ацетата целлюлозы, сорбенты. Твердая фаза может быть неподвижной или играть роль только носителя. Подвижная фаза – раствор, движущийся по не подвижной фазе (насителю) с определенной скоростью.

В качестве подвижной фазы могут быть использованы следующие органические растворители (см. таблицу):

Подвижные хроматографические фазы
Простые	Сложные
Бутиловый спирт	Бутанол + уксусная кислота
Изопропиловый спирт	Бутанол + пиридин
Уксусная кислота	Изопропанол + у ксусная кислота

Если твердая фаза играет роль только носителя, тогда не подвижной фазой является вода, а подвижной – органические растворители:

Хроматографические фазы
Подвижные	Неподвижные
Бутиловый спирт
Изопропиловый спирт	Вода
Уксусная кислота	дистиллированная
Этиловый спирт

Вода будет двигаться по носителю медленнее, чем органический растворитель.

3. Метод Клауса – клоттинговый метод. При добавлении к исследуемой плазме раствора тромбина время свертывания зависит только от концентрации фибриногена.

Эталоны ответов к билету №14.

1. В печени происходит синтез апо-ферментов – белковых компонентов различных ферментов организмов. Когда фермент выполнит свою функцию, процесс утилизации так же происходит в клетках печени – гепатоцитах.

1. ЛДГ – лактатдегидрогеназа – фермент, катализирующий реакцию дегидрирования лактата в пируват: лактат + НАD⁺ → пируват + НАDН, так же обратную реакцию гидрирования пирувата в лактат: пируват + НАDН → лактат + НАD⁺. ЛДГ имеет четвертичную структуру, для которой характерно наличие двух субъединиц: М и Н. В каждой молекуле ЛДГ имеется 4 субъединицы, сочетания которых образует пять изо-форм ЛДГ, которые обозначаются арабскими цифрами:

• ЛДГ₁ – сердечная форма – НННН
• ЛДГ₂ – мышечная форма – НННМ
• ЛДГ₃ – лейкоцитарная форма – ННММ
• ЛДГ₄ – панкреатическая форма – НМММ
• ЛДГ₅ – печеночная форма – ММММ

Изоформы ферментов, или изоферменты, это ферменты, которые имеют одинаковый активный цент и катализируют одну и ту же реакцию, но отличаются длинной носителя, временем катализируемой реакции, локализацией и некоторыми другими признаками.

1. Метод Абильгардта – клоттинговый метод. Исследуемая плазма дефибринируется нагреванием при 56ºС, к ней добавляется избыток тромбина, при этом тромбин и находящийся в плазме АТ – антитромбин – взаимодействуют. Затем в смеси определяют остаточный тромбин, добавляя в нее разведенную плазму, содержащую фибриноген. Чем активнее АТ, тем больше тромбина он свяжет, тем меньше его останется в смеси и тем больше будет время свертывания.

Эталоны ответов к билету №15.

1. Регуляция обмена кальция и фосфора осуществляется гормонами паращитовидных и щитовидной желез.

Паратгормон обеспечивает иммобилизацию кальция из скелетной ткани в кровь, в следствие чего концентрация его в крови увеличивается. Кальцитонин регулирует обратный процесс мобилизации кальция в кости и снижения его концентрации в крови. Кальцитриол действует аналогично паратгормону.

Концентрация фосфора регулируется этими же гормонами и концентрацией кальция в крови. Уровень неорганического фосфора прямо пропорционально зависит от уровня кальция в крови. Концентрация липоидного фосфора обратно пропорциональна концентрации нейтральных жиров.

2. КК – креатинкиназа – фермент, катализирующий дефосфорилирование креатин-фосфата. Молекула КК обладает четвертичной структурой, которая состоит из двух субъединиц М и В. Сочетания этих субъединиц образует три изоформы данного фермента:

• КК- ВВ – бульбарная форма – локализуется в мозговой ткани
• КК-ММ – мышечная форма – локализуется в мышцах
• КК-МВ – сердечная форма – локализуется в сердечной мышце

КК-МВ является маркером нарушения сердечно-сосудистой системы.

3. Из плазмы получают эуглобулиновую фракцию, на которой образуется сверток фибрина. Полученный сверток фибрина лизируется под действием активного ХII фактора и других активаторов фибринолиза за определенное время.

Эталоны ответов к билету №16.

1. Электролиты в организме человека – это катионы калия и натрия и анионы хлора. Их регуляция осуществляется гормонами надпочечников – минералкортикоидами и вазопрессином.

Альдостерон – минералкортикоид – способствует экскреции калия из организма, задержке натрия и воды в организме. Так же усиливает всасывание натрия в ЖКТ (желудочно – кишечном тракте).

Вазопрессин – гормон мозгового вещества надпочечников – регулирует реабсорбцию воды во вторичных почечных канальцах нефрона, способствуя тем самым задержке натрия и хлоридов в организме.

2. Фибринолиз – процесс растворения фибрина. Биологическая роль фибринолитической системы состоит в том, что она растворяет тромб после заживления поврежденной стенки капилляра. Кроме этого фибринолизу подвергается тромб, образовавшийся случайно в неповрежденном капилляре.

В состав системы фибринолиза входит плазминоген (не активный фактор), который актвируется активаторами фибринолиза в плазмин. Промежуточные продукты фибринолиза – это Ɗ – димеры и фибрин – мономерные комплексы. Конечные продукты фибринолиза – это ПДФ (продукты деградации фибрина).

3. Для бумажной хроматографии характерно использование хроматографической бумаги в качестве твердой фазы (носителя), по которой осуществляется движение смеси разделяемых веществ.

Принцип данного метода состоит в использовании воды в качестве неподвижной фазы и органического растворителя в качестве подвижной фазы. Вода и органический растворитель движутся по носителю с разной скоростью. Компоненты смеси, хорошо растворяющиеся в воде, движутся медленнее, а те, которые растворяются в органике, движутся быстрее. Из-за разной скорости движения происходит разделение компонентов смеси.

Эталоны ответов к билету №17.

1. Адреналин и норадреналин – гормоны, которые синтезируются мозговым веществом надпочечников.

Адреналин регулирует углеводный обмен в организме. Он способствует распаду гликогена в печени и выходу глюкозы в кровь, что приводит к гипергликемии. Адреналин увеличивает силу мышц. Кроме этого адреналин вызывает сужение большинства кровеносных сосудов, повышение АД, тахикардию, расширение зрачка и бронхов.

Норадреналин обладает сосудосуживающим эффектом, резко повышает АД. В отличии от адреналина он вызывает рефлекторную брадикардию.

2. Плазмин – основной фактор системы фибринолиза. Не активная форма – плазминоген. Является пептидазой серинового ряда (серпин). Плазмин имеет сродство к аминокислоте лизину и разрушает пептидные связи в молекулах фибрин – полимера, образованные лизином. При этом фибриновая сеть – основа тромба – разрушается и тромб элиминируется.

3. Тонкослойная хроматоргафия проводится так же, как и бумажная, но вместо хроматографической бумаги в качестве твердой фазы (носителя) используется фольга, покрытая тонким слоем сорбента. Движение разделяемых веществ смеси происходят в тонком слое сорбента (силикогель), который пропитывается смесью подвижной (органический растворитель) и неподвижной (вода) фаз. Компоненты смеси, растворяющиеся в воде, движутся медленнее, а – в органическом растворителе – быстрее. Из-за разной скорости движения компоненты смеси разделяются.

Эталоны ответов к билету №18.

1. Плазма и сыворотка крови – биологический материал для исследования – утилизируются в специальную емкость с дезинфицирующим раствором и выдерживается в течение 30-60 минут. Флаконы и пробирки из-под материала (пустые) утилизируются в другую емкость с тем же дезинфицирующим раствором в течение 30-60 минут.

2. Нарушения системы гемостаза классифицируются по нарушению функций и происхождению.

Первичные нарушения гемостаза – это наследственная патология, связанная с генетическими аномалиями.

Вторичные нарушения – это приобретенные патологии, которые могут протекать, как самостоятельные или как сопутствующие заболевания.

Тромбозы – заболевания системы гемостаза, связанные с уменьшением времени свертывания крови. При этом может наблюдаться истощение фибринолитической системы гемостаза. Тромб образуется в не поврежденных сосудах.

Геморрагии – заболевания системы гемостаза, связанные с удлинением времени свертывания крови.

Различают так же нарушения:

· Внутреннего механизма свертывания

· Внешнего механизма свертывания

· Смешанные нарушения

· Нарушения фибриногена

3. Принцип гель-фильтрации состоит в пропускании смеси веществ через другое вещество, между молекулами которого имеются отверстия (поры) определенной величины (метод молекулярных сит). При вертикальном движении более тяжелые соединения выходят раньше и быстрее, а легкие медленнее, в связи с чем происходит разделение молекул различных веществ. Используется разделение высоко и низкомолекулярных соединений.

Эталоны ответов к билету №19.

1. Различают следующие виды тромбов:

Тромбоцитарный – образуется в капиллярах за счет компонентов сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Его называют «белый» тромб. Основная роль в его образовании принадлежит тромбоцитам, которые активируются, выпускают псевдоподии, адгезируются поврежденной стенкой капилляра и агрегируются между собой.

Венозный – образуется в крупных сосудах, где отсутствует высокое постоянное давление крови. Основная роль принадлежит фосфолипидам и коллагену стенки сосуда, а так же – плазменным факторам свертывания (коагуляционный гемостаз)

Артериальный – в тромбообразовании принимают участие сосудисто-тромбоцитарный и коагуляционный гемостаз. Тромбоцитарный тромб находится внутри коагуляционного, поэтому тромб выглядит двухслойным. Образуется такой тромб в крупных сосудах, где кровь находится под высоким постоянным давлением.

2. Элюирование – это извлечение. Этот процесс применяется при проведении бумажной и тонкослойной хроматографии. Окрашенные участки хроматограммы аккуратно вырезаются, измельчаются и помещаются в пробирки, содержащие элюирующий раствор. Инкубация в растворе в течение 20 минут до полного перехода окрашенного комплекса с носителя в раствор. Затем проводится фотометрирование полученных фракций против контроля – элюирующего раствора.

3. Кинетический метод исследования – это метод непрерывной фиксации (измерения) скорости изменения оптической плотности при проведении биохимической реакции.

Эталоны ответов к билету №20.

1. Контринсулярные гормоны – антогонисты инсулина – вызывают гипергликемию. К ним относятся:

Глюкогон – гормон голода, вызывает распад гликогена печени, выход в кровь необходимого количества глюкозы, синтез сыворточной формы глюкозы: глюкозо-1-фосфат

Адреналин – гомон стресса, вызывает быстрый распад гликогена печени и мышц, гипергликемию, увеличение силы и частоты мышечных сокращений

Глюкокортикоиды – гормоны глюконеогенеза – синтеза углеводов из не углеводных компонентов.

2. При остром панкреатите проводят исследование сыворотки крови на следующие ферменты:

- α- амилаза общая – интегральный тест, позволяющий судить о проницаемости мембран клеток панкреаса; обладает низкой специфичностью как маркер панкреатита (57 %), т.к. увеличивается не только при остром панкреатите.

- амилаза панкреатическая – более чувствительный тест (74 %), при остром панкреатите увеличивается

- липаза панкреатическая – специфичность 89 – 92 %, наиболее приемлемое исследование, увеличивается при остром панкреатите.

3. Принцип калибровки колонки при проведении колоночной гель-фильтрации состоит в пропускании через колонку смеси двух веществ:

- Голубой декстран – высокомолекулярное вещество – полисахарид

- Хромат калия – низкомолекулярное соединение желтого цвета

Смесь имеет зеленый цвет. При прохождении смеси через вертикальную колонку, голубой декстран, как более тяжелое вещество, выходит из колонки первой фракцией и собирается в пробирку. Хромат калия имеет меньшую молекулярную массу и выходит второй фракцией. Если оба вещества полностью разделились, колонка считается откалиброванной.

Эталоны ответов к билету №21.

1. Хроматография является эффективным методом анализа сложных смесей веществ. Этот метод вызвал большой интерес среди широкого круга химиков, биологов и медиков, приобрел важное значение в исследовательской работе и нашел применение в промышленности и медицине в качестве экспресс-метода.

Для медицины имеет большое значение определение следующих соединений:

· антиоксидантов

· аминокислот

· белков, пептидов,

· алкалоидов

· стероидов (холестерин, желчные кислоты, стероидные гормоны)

· витаминов (жиро- и водорастворимых)

2. Для исследования ферментного кардиоспектра определяют активность следующих ферментов:

Кретинкиназа сердечная – КК-МВ – используется для ранней диагностики инфаркта миокарда, т.к. активность КК увеличивается уже через 4 часа и возвращается к референтным пределам через 8-12 час.

Аминотрансферразы – АлТ и АсТ – активность увеличивается через 12 часов и возвращается к референтным пределам через 48 час.

Лактатдегидрогеназа сердечная – ЛДГ₁ – используется для поздней диагностики инфаркта миокарда, т.к. активность ЛДГ₁ увеличивается через 72 часа и возвращается к референтным пределам на 6 - 8 сутки.

3. Белки сыворотки крови помещают в щелочной буфер с рН=8,4. При этом белковые молекулы приобретают отрицательный заряд и под действием постоянного электрического поля движутся от катода к аноду. Скорость движения при горизонтальном электрофорезе прямо пропорциональна величине заряда, и обратно пропорциональна молекулярной массе.

Эталоны ответов к билету №22.

1. Изоферменты – группа ферментов, катализирующих одну и ту же реакцию. Многие ферменты имеют изоформы – свои аналоги – которые обладают одинаковым активным центром. Изоформы имеют: ЛДГ, фосфатаза и некоторые другие ферменты. Изоферменты отличаются друг от друга некоторыми свойствами:

Локализацией – разные изоформы синтезируются в определенных клетках (например, изоформы ЛДГ - лактатдегидрогеназы) или в разных участках клетки (например, АсТ - аспартатаминотрансферраза - имеет цитозольную и митохондриальную изоформы)

рН – разные изоформы проявляют активность при разных рН (например, КФ (кислая фосфатаза – 5,0) и ЩФ (щелочная фосфатаза – 8-9)

Скоростью катализируемой реакции – есть медленные (реакция протекает в пролонгированном режиме) и быстрые (реакция протекает в ускоренном режиме) изоформы

Органами-мишенями – активность разных изоформ направлена на строго определенные клетки и ткани

2. Энзимодиагностика заболеваний печени включает определение активности ферментов:

Щелочная фосфатаза – ЩФ – ее активность увеличивается при гепатитах вирусного происхождения, циррозе и некоторых новообразованиях

Гаммаглутамилтранспептидаза – ГГТп – ее активность увеличивается при алкогольном гепатите и алкогольном циррозе печени

Аминотрансферразы – АсТ и АлТ – их активность увеличивается при изменении проницаемости мембран гепотоцитов, предшествующем любой патологии печени; при этом сначала возрастает активность АлТ, т.к. это цитозольный фермент, который сразу выходит в кровь; активность АсТ в начале возрастает незначительно, но когда начинается процесс деструкции клеточных элементов печени, затрагивающий разрушение митохондрий, АсТ увеличивается значительно.

3. Виды электрофореза: электрофорез проводится на твердом носителе, по которому передвигаются разделяемые фракции. Такой электрофорез называется зональный, так как четко различают окрашенные зоны, между которыми остаются не окрашенные участки (по Тизелиусу). Электрофорез можно классифицировать по:

1. типу носителя (твердой фазы)
2. способу проведения
3. направлению движения

	Электрофорез
Вертикальный	Бумажный	Капиллярный
Горизонтальный	Тонкослойный	Иммунноэлектрофорез
Наклонный	Пленочный	Колоночный

Эталоны ответов к билету №23.

1. Вилочковая железа вырабатывает гормон тимазин. Максимальная активность тимазина наблюдается до наступления пубертатного периода. Функция тимазина заключается в том, что он блокирует ферменты, обеспечивающие синтез половых гормонов в половых железах, рост и развитие самих половых желез и прежде временное половое созревание организма.

2. Индивидуальные белки фракции – это комплекс белков, образующих данную фракцию. К α – фракции относятся следующие белки:

α₁ – антитрипсин (45 кД) – ингибирование протеиназ (пептидаз)

α – липопротеин (200 кД) – транспорт холестерина и жирорастворимых витаминов

α₁ – кислый гликопротеин (орозомукоид) (44,1 кД) – обладает широким спектром функций (белок острой фазы, активация синтеза фибрилл и коллагена, входит в состав слизистых секретов)

протромбин (72 кД) – фактор свертывания

тирео (связывающий) глобулин (36,5 кД) – на молекуле синтезируется тироксин

3. Кислая фосфатаза (КФ) расщепляет фосфорилированный субстрат с образованием пиррофосфата и промежуточного соединения, которое взаимодействует с хромогенным реагентом. В процессе реакции хромогенный реагент превращается в продукт красного цвета. Интесивность окраски прямо пропорциональна активности КФ.

Эталоны ответов к билету №24.

1. Тромбин – сериновая пептидаза, коагуляционный фактор свертывания, II. Не активная форма – протромбин. Синтезируется в печени, используется как показатель синтетической функции печени.

Основная функция тромбина – активация фибриногена в фибрин. Тромбин отщепляет от α-цепи фибриногена сигнальный А-пептид и от β-цепи – сигнальный В-пептид. При этом образуются активные концы цепей, которые соединяются между собой в цепь фибрин-мономера. Таких цепей формируется несколько.

2. Индивидуальные белки – это комплекс белков, входящих с состав определенной фракции. В состав β-фракции входят следующие белки:

Трансферрин (80 - 90 кД) – транспортная функция (транспорт железа)

β – липопротеины (3000 кД) – транспорт холестерина, фосфолипидов и гормонов.

С₃ и С ₄ (от 185 до 417 кД) – компоненты комплемента

Гемопексин (80 кД) – специфический белок сыворотки крови, носитель гемма, предотвращает его выведение с мочой.

3. Реакция идет в три стадии:

кк

- Креатин - фосфат + АДФ → Креатин + АТФ

ГК

- АТФ + Глюкоза → Глюкозо-6-Ф + АДФ

Г-6-ФДГ

- Глюкозо-6-Ф + НАДФ → Глюконат-6-Ф + НАДФН + Н⁺

Количество НАДФН прямо пропорционально активности КК (креатинкиназы).

Эталоны ответов к билету №25.

1. Для проведения б/х исследований используются готовые б/х наборы реагентов, которые выпускаются фабричным способом различными фирмами.

Реагенты снабжены инструкциями, в которых есть раздел по технике безопасности работы с данными конкретными реагентами. Обычно это общие требования:

· применять только in vitro

· использовать перчатки, если в состав реагентов входят кислоты

· использовать перчатки и маски, если в состав реагентов входят щелочи

· использованные реагенты смешивать с большим количеством моющих средств (1:200)

· утилизировать через обычный слив, разбавляя большим количеством проточной воды

2. Индивидуальные белки – это комплекс белков, входящих с состав определенной фракции. В состав λ-фракции входят следующие белки, относящиеся к иммуноглобулинам (IgG):

IgG (150 кД) – являются антителами

IgA (180 кД) – первичный иммунный ответ

IgM (900 кД) – антиаллергическое действие

IgD (17()кД) – защита слизистых от чужеродных агентов

IgЕ (190кД) – функции находятся в стадии изучения

ЩФ

3. р-нитрофенилфосфат → р-нитрофенол + фосфат

Окраска прямо пропорциональна активности ЩФ (щелочной фосфатазы).

Эталоны ответов к билету №26.

1. ХII ф. свертывания крови – фактор Хагемана – активатор каскада (внутреннего механизма свертывания крови). При небольших повреждениях эндотелия обнажается коллаген, к которому ХII ф. имеет сродство. Он прикрепляется к коллагену (плотный контакт), который является активатором ХII ф. Кроме коллагена ХII ф. активируется жирными ислотами, тканевыми активаторами, катехоламинами (адреналин, норадреналин), серотонином. Активный ХIIа ф. активирует прекалликреин в калликреин, запуская тем самым каскад – внутренний механизм свертывания.

2. Острая фаза – это состояние, при котором наблюдается поражение клеток и тканей организма. Начинается процесс с изменения проницаемости клеточных мембран, затем следуют промежуточные стадии, а на более поздних стадиях может наблюдаться деструкция клеточных элементов.

Существует группа белков – острофазные белки –, концентрации которых реагируют на острофазные изменения клеток и тканей организма. К острофазным белкам относятся: гаптоглобин, церулоплазмин, фибриноген, с-реактивный белок, α-1-протеазный ингибитор, α-2- макроглобилин, α-1-кислый гликопротеин (орозомукоид), трансферрин.

3. Реакция идет в две стадии:

АLТ

- 2-Оксоглутарат + L –Аланин → Глутамат + Пируват

LDH

- Пируват + НАДН + Н⁺ → L - лактат + НАД⁺

Количество НАД⁺ прямо пропорционально активности аланинаминотрансферразы.

Эталоны ответов к билету №27.

1. VIII ф. – коагуляционный фактор каскада, состоящий из двух субъединиц: агрегационной и коагуляционной. Коагуляционная субъединица – это непосредственный активатор Х ф. – фактора Прауэра – активатора протромбина в тромбин.

2. Индивидуальные белки – это комплекс белков, входящих с состав определенной фракции. В состав α₂-фракции входят следующие белки:

α ₂ – макроглобулин (820 кД) – ингибитор протеаз, участвует в развитии инфекционных и воспалительных реакций

гаптоглобин (85 -1000 кД) – связывает свободный гемоглобин сыворотки крови

церулоплазмин (132 кД) – связывание и транспорт ионов меди

эритропоэтин (30 кД) – необходим для эритропоэза

3. Реакция идет в две стадии:

GOТ

-2-Оксоглутарат + L – Аспартат → Глутамат + Оксалацетат

MDH

- Оксалацетат + НАДН + Н⁺ → Малат + НАД⁺

Эталоны ответов к билету №28.

1. VII ф. – плазменный фактор проконвертин, активная форма – конвертин. Активируется Vа (активным) фактором – акселерином – и кальцием. VII ф. – сериновая пептидаза, функцией которой является активация Хф. в Ха путем отщепления сигнального пептида. Данный механизм является внешним механизмом свертывания и активируется тромбопластином, который освобождается из сильно поврежденной стенки сосуда и выходит в кровь.

2. Перед началом работы необходимо провести инструктаж:

· По противопожарной безопасности – информация содержится в специальном журнале по п/б, она доводится до сведения инструктируемых в полном объеме;

· По технике безопасности – информация содержится в специальном журнале по т/б, она так же доводится до сведения инструктируемых в полном объеме;

Специальные журналы находятся в рабочем кабинете, они пронумерованы, оформлены по стандарту и заполняются каждый раз по утвержденной необходимости. Средства по п/б (одеяло, песок, баллон с пеной или порошком) должны находится в доступном месте. Розетки должны быть заземлены и напряжение в них – не более 220 В, о чем должна свидетельствовать надпись рядом с розетками. Обязательно должны быть использованы средства индивидуальной защиты.

3. Реакция идет в две стадии:

GOТ

-2-Оксоглутарат + L – Аспартат → Глутамат + Оксалацетат

MDH

- Оксалацетат + НАДН + Н⁺ → Малат + НАД⁺

Эталоны ответов к билету №29.

1. Изоформы ЛДГ (лактатдегидрогеназы) – группа изоферменов, имеющих в своем составе активный центр фермента лактатдегидрогеназы. Катализируют реакцию дегидрирования лактата в пируват. Включает пять изоформ, каждая из которых имеет свою локализацию и клинико-диагностическое значение.

• ЛДГ₁ – сердечная форма – НННН – поздняя диагностика инфаркта миокарда
• ЛДГ₂ – мышечная форма – НННМ – диагностика заболеваний скелетной мускулутуры
• ЛДГ₃ – лейкоцитарная форма – ННММ – диагностика поражения лейкоцитов
• ЛДГ₄ – панкреатическая форма – НМММ – один из маркеров заболеваний поджелудочной железы
• ЛДГ₅ – печеночная форма – ММММ – обладает наименьшей электрофоретической подвижностью, один из маркеров печеночно-клеточной недостаточности.

2. Тромбин – белок, сериновая пептидаза. Неактивная форма – протромбин. Выполняет следующие функции:

· плазменный фактор коагуляционного гемостаза (II)

· активирует фибриноген в фибрин

· самоактивация (протромбин активирует в тромбин)

· фактор роста эндотелия

· активатор тромбоцитов

· реципроктная (обратная) активация VIIIф. (внутренний механизм), VII и Vфф. (внешний механизм) и XIIIф. – фибрин-стабилизатор.

3. Синтетический субстрат нитрофенилгликозид гидролизуется α-амилазой до промежуточного продукта. Промежуточный продукт дополнительно ферментируется α-глюкозидазой и расщепляется до нитрофенола и глюкозы. Увеличение нитрофенола окрашивает раствор.

Эталоны ответов к билету №30.

1. КК – креатинкиназа – фермент, катализирующий дефосфорилирование креатин-фосфата. Молекула КК обладает четвертичной структурой, которая состоит из двух субъединиц М и В. Сочетания этих субъединиц образует три изоформы данного фермента:

• КК- ВВ – бульбарная форма – локализуется в мозговой ткани
• КК-ММ – мышечная форма – локализуется в мышцах
• КК-МВ – сердечная форма – локализуется в сердечной мышце

КК-МВ является маркером нарушения сердечно-сосудистой системы. Используется для ранней диагностики инфаркта миокарда, т.к. ее активность увеличивается уже через 4 часа после инфаркта. Мышечная форма реагирует на патологические процессы в скелетных мышцах. Бульбарная форма используется как маркер заболеваний нервной ткани.

2. Тироксин – гормон щитовидной железы. Регулирует следующие функции в организме:

Общий обмен веществ – обмен белков, жиров и углеводов (распад, усвоение, освобождение энергии)

Морфогенез – структурирование клеток и тканей организма, репарация поврежденных клеточных элементов

Адаптация – процессы приспособления к меняющимся условиям внешней и внутренней среды организма

Воспроизведение – процессы размножения

3. Для кинетического метода исследования используется многократное фотометрирование пробы через равные промежутки времени (30 или 60 сек – определяется по инструкции). Полученные результаты обозначаются Е₁,Е₂, Е₃ и т.д. Обычно получают 3-4 значения экстинкции (Е). Е может возрастать или убывать в зависимости от реакции. При расчете находят:

· разность между близкими измерениями, обозначается Δ Е (Е₂ – Е₁ = Δ Е₁, Е₃ – Е₂ = Δ Е₂)

· среднюю арифметическую всех полученных разностей ([Δ Е₁ + Δ Е₂ ] /2 = Δ Е_ср.)

· активность фермента: рассчитанное значение умножается на коэффициент, полученный эмпирически для данного метода и взятый из инструкции к готовому набору б/х реагентов

. Это значение называется фактор F. (Ак._оп. = F ^х Δ Е_ср)