Мета роботи: підібрати оптимальні умови стерилізації листків картоплі,отримати стерильну калюсну культуру.
Матеріали і обладнання: рослини картоплі, вирощенів теплиці,мильний розчин, 70%-й розчин спирту, стаканчики зі стерильною дистильованою водою, концентрований розчин “Білизни”, стаканчики для стерилізуючих розчинів, чашки Петрі зі стерильним калюсним середовищем №1 (табл.8), чашки Петрі зі стерильним фільтрувальним папером, стерильні чашки Петрі, пінцети, скальпелі, спиртівка, спирт, ламінар бокс, парафілм.
ХІД РОБОТИ
1. Приготувати розбавлені розчини “Білизни”(робота 4).
2. Інтактні листки картоплі промити у проточній воді, витримати 1-2 хв. у мильному розчині, промити проточною, а потім дистильованою водою.
3. Промиті листки у боксі занурити у 70%-й етанол на 10-15 сек.
4. Рослинний матеріал помістити у стерилізуючий розчин з відповідною концентрацією “Білизни” і витримати відповідний час (табл. 10).
5. Рослинний матеріал відмити у трьох порціях стерильної дистильованої води (витримати по10 хв.).
|
|
6. Для підсушування стерильним пінцетом перенести рослинний матеріал у стерильну чашку Петрі з фільтрувальним папером.
7. Стерильний листок розчленити на експлантати по 5-10 мм, які помістити на живильне середовище.
8. Чашку підписати і закрити парафілмом.
9. Чашки з рослинним матеріалом культивувати у термостаті без освітлення при 250 + 10С.
10. Через 4-7днів визначити оптимальні умови стерилізації. Життєздатність культури оцінити через 25-30 днів: по периметру життєздатного експлантата утвориться калюс.
Результати досліджень представити у таблиці 10.
Таблиця 10
№ п/п | Концентра-ція розчину “Білизни” | Тривалість стерилізації (хв) | Загальна кількість експлан-татів | Кількість асептичних експлантатів через7 днів | Кількість життєздатних експлантатів через 30 днів | ||
штук | % | штук | % | ||||
1:4 | |||||||
1:3 | |||||||
1:2 | |||||||
1:1 |