Методика определения аминного азота в сыворотке крови нингидриновым методом

ПРИНЦИП МЕТОДА:

Свободные α-аминокислоты образуют с нингидрином фиолетовое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна количеству свободных аминокислот.

ХОД РАБОТЫ:

В центрифужную пробирку отмеривают 1 мл сыворотки и 1 мл 1Н СН3СООН, хорошо перемешивают, закрывают пробкой и кипятят 20 мин в водяной бане. Центрифугируют 20 мин 1500 об/мин. 0,4 мл центрифугата помещают в мерные пробирки, затем прибавляют 4 мл фосфатного буфера (рН=6,8) и 0,5 мл 1% водного раствора нингидрина. Содержимое пробирки перемешивают и ставят в кипящую водяную баню. Окраска развивается в течение 40 мин, переходя от буровато-грязного цвета к лиловому и дальше к фиолетовому. Пробирки охлаждают и доводят объем дистил. водой до 7 мл. Колориметрируют при зеленом светофильтре в кювете шириной слоя 5 мл. Количество аминного азота находят по прилагаемой таблице. Норма составляет 2,96 ± 0,1 мг%.

Практическое занятие №11.

Задание к занятию №11.

Тема: Обмен и функции аминокислот.

Учебные и воспитательные цели:

-Общая цель занятия: научить использовать знания о различных процессах, в ходе которых может

образовываться аммиак, о механизмах его обезвреживания, знать биосинтез и роль креатина, креатин-

фосфата в синтезе АТФ, а также уметь использовать эти знания в практической деятельности врача.

- Частные цели:

уметь определять количество мочевины в сыворотке крови, креатинина в моче и выделять

креатин из мышечной ткани.

1. Входной контроль знаний:

1.1. Тесты.

1.2. Устный опрос.

1.3. Реферативные сообщения.

2. Основные вопросы темы:

2.1. Образование аммиака в организме и пути его обезвреживания. Гипераммониемия.

2.2. Биосинтез мочевины как основной механизм предотвращения накопления аммиака. Клиническое

значение определения мочевины.

2.3. Синтез креатина, креатин-фосфата, значение этого синтеза для организма. Клиническое

значение определения креатинина.

2.4. Особенности обмена отдельных аминокислот (глицин, метионин, глутаминовая и аспарагиновая

кислоты, триптофан, фенилаланин).

2.5. Нарушения в обмене отдельных аминокислот.

2.6. Патология азотистого обмена.

3. Лабораторно-практические работы:

3.1. Определить количество мочевины в сыворотке крови.

3.2. Определить количество креатинина в моче.

3.3. Выделить креатинин из мышечной ткани.

Выходной контроль

4.1. Ситуационные задачи.

5. Литература:

5.1. Материал лекций.

5.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: «Медицина», 1990г., с. 350-354, 364-368.

5.3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: «Медицина», 2004г., с. 447-464.