Исследование действия пепсина

Принцип метода. Пепсин действует на внутренние пептидные связи, расщепляя белки на пептиды. О действии пепсина на белок, например на фибрин (нерастворимый белок плазмы), можно судить, наблюдая растворение кусочков фибрина. Полученный раствор дает положительную биуретовую реакцию, указывающею на появление в растворе пептидов.

Ход определения. 1. В три пробирки наливают по 1 мл раствора пепсина или желудочного сока. Содержимое первой пробирки кипятят 2 мин и охлаждают под струей воды. Содержимое второй пробирки нейтрализуют раствором NaHCO₃ до щелочной реакции по лакмусу (3-4 капли 10%-ного раствора NaHCO₃). Третью пробирку оставляют без изменения.

2. Во все три пробирки добавляют по маленькому кусочку фибрина или яичного белка. Пробирки выдерживают в термостате при 37˚С 30-45 мин. Затем их вынимают, встряхивают, отмечают видимые изменения белка (растворение, набухание) и проделывают биуретовую реакцию. Положительная биуретовая реакция получается только в третьей пробирке.

Оформление работы. Полученные результаты вносят в таблицу и делают выводы.

№ пробирки	Субстрат	Фермент	Реакция среды	Видимые изменения	Биуретовая реакция	Выводы