Определение общего холестерина в сыворотке крови по методу Илька

Содержание общего холестерина в сыворотке крови здорового человека колеблется в пределах 150-250 мг/дл (среднее значение 200 мг/дл). На эфиры холестерина с жирными кислотами приходится 60-70% от общего холестерина и 30-40%- на свободный холестерин. В сыворотке крови отношение свободного холестерина к эфирообразующему- величина постоянная.

Увеличение содержания холестерина в плазме крови (гиперхолестеринемия) наблюдается при микседеме, менингитах, диабете, атеросклерозе, при некоторых заболеваниях печени. Описана также наследственная гиперхолестеринемия. Снижение содержания холестерина в плазме (гипохолестеринемия) отмечается при хронической сердечной недостаточности, острых инфекционных заболеваниях, острых панкреатитах, гипертиреозе.

Принцип метода. Метод основан на том, что холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксусной и серной кислот образует окрашенные продукты, интенсивность окраски которых определяется колориметрически.

Ход определения. В сухую пробирку (присутствие следов воды мешает развитию окраски) вносят 2 мл рабочего реактива (реактив отмеривают стеклянным цилиндром) и 0,1 мл негемолизированной сыворотки. Сыворотку добавляют медленно, так чтобы она стекала по стенке пробирки. Пробирку энергично встряхивают 10-12 раз и помещают в термостат при 37?С на 20 мин. Для приготовления контрольной пробы (одна-две пробы на группу) в сухую пробирку отмеривают 2 мл рабочего реактива. Окраску растворов измеряют на ФЭКе против контроля с красным светофильтром. Содержание холестерина в пробирках определяют по калибровочной кривой.

Калибровочный график для определения концентрации холестерина.

Оформление работы. Записывают принцип метода, результаты колориметрии, расчеты.