Реакция на компоненты нуклеопротеинов в гидролизате дрожжей

Принцип метода. Нуклеиновые кислоты в клетке находятся в виде нуклеопротеиновых комплексов, которые рассматриваются как сложные белки, простетической группой которых являются нуклеиновые кислоты. Для качественного анализа химического состава нуклеопротеинов может быть использован гидролизат дрожжей как объект, богатый нуклеопротеинами.

При частичном гидролизе нуклеопротеины распадаются на белок (протамины и гистоны) и нуклеиновые кислоты. При полном гидролизе нуклеиновые кислоты распадаются на составляющие их компоненты по схеме:

Нуклеиновые кислоты (полинуклеотиды)
↓
Мононуклеотиды
↓
Пуриновые или пиримидиновые основания	Рибоза или дезоксирибоза	Фосфорная кислота

Для изучения компонентов нуклеопротеинов удобно использовать растительный объект-пекарские дрожжи. Продукты кислотного гидролиза нуклеопротеинов могут быть обнаружены специфическими реакциями: биуретовой реакцией обнаруживают наличие полипептидов в гидролизате, пуриновые основания дают специфическую реакцию образованияосадка солей серебра, фосфорную кислоту обнаруживают по реакции с молибдатом аммония, рибозу или дезоксирибозу-с помощью реакции Троммера.

Ход определения.

1. Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата добавляют 10 капель 10%-ного раствора NaOH и 1 каплю 1%-ного раствора сульфата меди (II)/ Жидкость окрашивается в фиолетовый цвет.

2. Серебряная проба на пуриновые основания. 10 капель гидролизата нейтрализуют 1 каплей концентрированного аммиака и добавляют 5 капель 1%-ного раствора нитрата серебра. При стоянии через 3-5 минут выпадает небольшой рыхлый осадок серебряных соединений пуриновых оснований (аденина, гуанина), окрашенный в бурый цвет.

3. Проба Троммера на рибозу и дезоксирибозу. К 5 каплям гидролизата 10 капель 30%-ного раствора NaOH и 1-3 капли 7%-ного раствора сульфата меди до появления неисчезающей мути гидроксида меди (II). Жидкость перемешивают и верхний слой ее нагревают до начала кипения. Выпадает красный осадок оксида меди (I) или желтый осадок гидроксида меди (I) вследствие окисления рибозы и восстановлением Cu²⁺ до Cu⁺.

4. Молибденовая проба на фосфорную кислоту. К 20 каплям молибденового реактива (раствор молибдата аммония в азотной кислоте) добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на открытом огне. В присутствии фосфорной кислоты жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет. При охлаждении выпадает желтый кристаллический осадок комплексного соединения фосфорномолибденового аммония:

12(NH₄)₂MoO₄+H₃PO₄+21HNO₃ (NH₄)₃PO₄*12MoO₃ + 21NH₄NO₃ + 12H₂O

Фософорно-

молибденовый

аммоний

Оформление работы. Результаты лабораторной работы записывают в рабочую тетрадь в виде таблицы: