НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ
Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов.
Тема 5.2. Обмен и функции витаминов В5, В6, В7, В9, В12, С.
Качественные реакции на ниацин (витамин РР, никотиновая кислота, никотинамид)
Принцип метода. Биологическая функция ниацина заключается в том, что никотинамид служит активной частью коферментов НАД+ или НАДФ+, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях. РР-авитаминоз выражается в виде дерматита на симметричных участках тела, расстройствах деятельности желудочно-кишечного тракта, нервной системы.
Ход определения. 1. Качественная реакция ниацина с медью. Щепотку порошка (5-10 мг) витамина РР растворяют при нагревании в 10-20 каплях 10%-ного раствора уксусной кислоты. К нагретому до кипения раствору добавляют равный объем 5%0ного раствора ацетата меди. Жидкость становится мутной, при стоянии выпадает осадок синего цвета.
2. Качественная реакция обнаружения аминогруппы. Небольшое количество порошка витамина РР помещают в пробирку, прибавляют 2 мл 0,1 моль/л раствора гидроксида натрия и нагревают. Ощущают запах аммиака, который образуется при расщеплении амидной связи в молекуле ниацина.
|
|
ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБОТЫ ДЛЯ ВЫПОЛНЕНИЯ
НА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЯХ
Раздел V. Биохимия витаминов и гормонов.
Тема 5.3. Химическая природа, биосинтез, секреция и
Катаболизм гормонов.
Качественные реакции, подтверждающие белковую природу инсулина
Ход определения. 1. Биуретовая реакция. К 1 мл раствора инсулина добавляют 5-6 капель раствора гидроксида натрия и 1-2 капли раствора сульфата меди (2), перемешивают. Жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
2. Реакция Миллона. К 5-10 каплям раствора инсулина добавляют 2-3 капли реактива Милона и осторожно нагревают. Образуется осадок в виде сгустка красного цвета.
3. Реакция Фоля. К 5-10 каплям раствора инсулина (использовать неразбавленный препарат) добавляют 2-3 мл раствора NaOH и кипятят 10 мин на маленьком пламени горелки. После охлаждения добавляют 1-2 капли раствора Pb(ONa)2 - появляется бурое окрашивание.
Примечание. Раствор Pb(ONa)2 приготовить в отдельной пробирке. Для этого к одной капле раствора ацетата свинца добавляют по каплям 10%-ного гидроксида натрия до растворения образовавшегося осадка гидроксида свинца.
При стоянии или нагревании бурое окрашивание может усилиться до черного и может выпасть черный осадок.