Реагенти:
1. Стандартні поліклональні (ізогемаглютинуючі) сироватки груп 0(І), А(ІІ), В(ІІІ) двох різних серій кожної групи і стандартна сироватка групи АВ(IV). Титр сироватки (те максимальне її розведення, при якому може наступати реакція аглютинації) повинен бути не нижче 1:32, а для сироватки В (III) - не нижче 1:16. Для зручності стандартні сироватки різних груп підфарбовані у певний колір: 0(І) - безбарвна (сіра), А (II) - синя, В (III) - червона, АВ (IV) - яскраво-жовта. Вказані кольори групової приналежності співпадають з маркуванням етикеток крові та всіх препаратів крові.
2. 0,9% розчин NaCl.
Спеціальне устаткування, матеріали:
- Білі планшети або порцелянові (емальовані) тарілки.
- Скляні або пластмасові палички.
- Піпетки.
- Захисні рукавички.
Методика виконання:
Визначення проводять у приміщенні з достатнім освітленням при температурі від +15 до +25°С. Досліджують цільну кров, відмиті еритроцити, еритроцити в плазмі, сироватці або в 0,9% розчині натрію хлориду. Для дослідження не використовують пуповинну кров через можливість помилки, пов'язаної з потраплянням материнських еритроцитів. У хворих на анемію кров стабілізують гепарином.
|
|
- Площину маркірують, наносячи позначення зліва направо «О», «А», «В». Під відповідними позначками наносять по одній великій краплі (0,1мл) кожної сироватки двох серій;
- Поряд з кожною сироваткою наносять по одній маленькій краплі (0,01 мл) досліджуваного зразка крові дитини (еритроцитів), тобто у співвідношенні до сироватки 1:10;
- Змішують окремими скляними паличками кожну краплю крові (еритроцитів) з відповідною сироваткою;
- Змішавши всі краплі, пластину погойдують, потім на 1-2 хв. залишають у спокої і знову погойдують. Хоча аглютинація починається вже протягом перших 10-30 с., спостереження за ходом операції проводять не менше 5 хв., тому що можлива пізня аглютинація, наприклад, з еритроцитами групи А2;
- Через 3-4 хв. до крапель суміші сироватки з еритроцитами, де відбулась аглютинація, додають по 1 краплі (0,05 мл) 0,9% розчину NaCl і продовжують спостерігати до 5 хв. при періодичному погойдуванні пластини;
- У разі позитивної реакції в суміші з'являються видимі неозброєним оком дрібні червоні зернятка (аглютинати), що складаються зі склеєних еритроцитів, які можуть згруповуватись в більші пластівці. Сироватка стає безкольоровою;
- У разі негативної реакції рідина весь час (5 хв.) залишається рівномірно забарвленою і в ній не спостерігається зернистості (аглютинатів);
- Результати реакцій в обох краплях з сироватками однієї і тієї ж групи (двох різних серій) мають співпадати. В разі отримання аглютинації в усіх трьох парах крапель, проводять додаткове дослідження з сироваткою АВ (IV) для виключення неспецифічної аглютинації (так само, на протязі 5 хвилин).
|
|
Інтерпретація результатів:
В результаті досліджень можна отримати чотири різні комбінації позитивних та негативних реакцій*:
Група крові, що досліджується | Сироватка | |||
О (α, β) | А (β) | В (α) | АВ(без антитіл) | |
О | - | - | - | - |
А | + | - | + | - |
В | + | + | - | - |
АВ | + | + | + | - |
* (-) - відсутність аглютинації, (+) - наявність аглютинації. |
· Якщо аглютинація відсутня в усіх краплях - кров О (І) групи.
· Наявність аглютинації в першій та третій краплях при відсутності в другій - кров А (II)групи.
· Наявність аглютинації в першій та другій краплях при відсутності в третій - кров В (III)групи.
· Наявність аглютинації в першій, другій та третій краплях і відсутність в контрольній краплі з сироваткою АВ (IV) - кров АВ (IV)групи.
Можливі помилки:
- Невірне співвідношення кількості крові та сироватки (в нормі 1:10).
- Замалий час спостереження за реакцією (в нормі не менше 5 хв).
- Висока температура повітря (в нормі не більше 25°С).
- Відсутність контрольної реакції з сироваткою групи АВ (IV).
- Використання вологих піпеток, пластинок, забруднених паличок.
- Використання недостатньо активної сироватки (стара сироватка).
- Визначення групи крові у дітей при різноманітних патологічних станах (аутоімунна анемія під час ГХН, гнійно-септичні стани, НЕК, лейкози). Визначення групи крові необхідно проводити в лабораторних умовах з використанням стандартних сироваток з високою активністю.
- При наявності в досліджуваній крові слабкого підтипу антигену А2, реакції аглютинації з сироватками груп О(І) і В(ІІІ) починається пізніше (в середньому на 3-4 хвилини). Для уточнення результатів доцільне проведення в спеціалізованій лабораторії додаткової реакції з анти-А реактивом (реактив містить тільки анти-А антитіла і виготовляється з насіння рослини Dolichosbitforis).