Производственная ферментация

Получение посевного материала в лабораторных условиях

Требования техники безопасности при работе с фильтрами.

При проведении работ, связанных с перебивкой головного, угольного и промежуточного фильтра, должны соблюдаться следующие требования:

а) применяется спецодежда и средства защиты – сапоги резиновые, комбинезон х/б, марлевая повязка или респиратор «Лепесток», очки защитные с полугерметической маской, перчатки х/б и брезентовые. Спецодежда и средства защиты должны обеспечить максимум укрытия тела человека;

б) после перебивки фильтра спецодежда должна быть очищена от стекловаты и сдана в стирку;

в) при выгрузке стекловаты из фильтров необходимо непрерывно поливать стекловату (путем разбрызгивания водой);

г) отработанная набивка должна собираться в закрываемом ящике и выноситься сразу после перебивки фильтров;

д) по окончании перебивки работник должен принять душ.

Продуцентом декстрана является культура Leuconostoc mesenteroides СФ-4. Это факультативно анаэробные стрептококки. На жидкой синтетической среде образуют капсулы углеводного происхождения.

водят в два этапа.

1. Выращивание ПМ в пробирках.

Компоненты питательной среды, отвешенные на весах согласно прописи, растворяют в воде для инъекций. Массовая доля сахара в среде должна составлять (9,5±0,5)%, рН – (6,6±0,2). Среду фильтруют через двойной слой фильтровальной бумаги, разливают в стерильные пробирки и стерилизуют в автоклаве. После стерилизации среда должна быть бесцветной и прозрачной.

Простерилизованную среду в пробирках проверяют на стерильность путем выдержки в течение 3 сут. в термостатной камере последовательно при температуре (37,0±0,5)°С, затем при температуре (24,0±0,5)°С. Среда должна оставаться бесцветной и прозрачной.

Поддержание штамма в активном состоянии производят путем пересева культуры один раз в двое суток из пробирки в пробирку на свежеприготовленную среду. Пересев производят при строгом соблюдении асептических условий в специальном боксе, предназначенном только для проведения этих работ. Культуру выращивают в термостатной камере.

Чистоту культуры проверяют один раз в неделю путем высева из пробирок с культурой в мясо-пептонный бульон и на мясо-пептонный агар и микроскопирования мазков из высевов.

Активность культуры проверяют 1 раз в месяц путем выращивания на ферментационной среде в течение 2-х суток при температуре (24,0±0,5)°С с ежедневной проверкой выхода нативного декстрана. Для дальнейшей работы используют пробирки с культурой, давшей наибольший выход нативного декстрана и отвечающей следующим требованиям:

а) внешний вид – мутная густая жидкость;

б) продуктивность штамма – не менее 38,0% к загруженному сахару;

в) морфология культуры – цепочки кокков с капсулами;

г) отсутствие посторонних микроорганизмов.

2. Выращивание ПМ в колбах.

Для выращивания ПМ в колбах вместимостью 1000 мл используют (30±6) часовую культуру Leuconostoc mesenteroides СФ-4, выращенную в пробирках, в количествах (25±1) мл на каждую колбу. Состав среды аналогичный. Посев производят в боксе в асептических условиях. Засеянную среду в колбах поме-

щают в термостат и культивируют (30±6) ч. Для засева инокулятора используют ПМ из колб в количестве 10% к объему среды в инокуляторе (3 колбы по 700 мл). ПМ в колбах должен соответствовать следующим требованиям:

а) внешний вид – мутная густая жидкость;

б) морфология культуры – цепочки кокков с капсулами;

в) отсутствие посторонних микроорганизмов.

В отделении ферментации получают раствор нативного декстрана.

Питательная среда состоит из 10 компонентов: МgSO₄, КН₂РО₄, Na₂HPO₄, NH₄Cl, КCl, соль Мора, парааминобензойная кислота, пептон, сахар и вода для инъекций. Пропись среды приведена в таблице 3.1..

Таблица 3.1. – Пропись среды

Компоненты	Содержание компонентов, г/дм3
для инокуляторов	для ферментаторов
КCl	0,10	0,10
КН2РО4	1,00	1,50
МgSO4	0,10	0,10
Na2HPO4	4,40	4,40
NH4Cl	0,50	0,50
соль Мора	0,01	0,01
парааминобензойная кислота	0,05	0,05
пептон	0,20	0,30
Сахар	100,00 (глюкоза)	150,00 (сахар-песок)
вода для инъекций	остальное	остальное