2018-03-09
364
Порядок выполнения опыта. К 5 каплям раствора белка добавляют 3 капли 10%-ного раствора едкого натра и 1 каплю 1%-ного раствора сернокислой меди, перемешивают и содержимое пробирки приобретает сине-фиолетовый цвет. Нельзя добавлять избыточное количество сернокислой меди, т.к. синий осадок гидрата окиси меди маскирует фиолетовое окрашивание биуретового комплекса белка.
Химизм реакции:
Указания к составлению отчета по цветным реакциям
Наблюдения оформляются в виде таблицы с указанием типа реакции (общая, групповая, специфическая).
| № п/п | Название и тип реакции | Используемые реактивы | Наблюдаемое окрашивание | Группировки, открываются в белке |
| 1 | Биуретовая |
Опыт 2. Нингидриновая реакция на аминокислоты характерна для аминогрупп, находящихся в a-положении. Нагревание растворы белка, a-аминокислот и пептидов с нингидрином дают синее или фиолетовое окрашивание.
Порядок выполнения опыта. К 5 каплям раствора белка приливают 5 капель 0,1%-ного водного раствора нингидрина, кипятят 1-2 мин, появляется розово-фиолетовое или сине-фиолетовое окрашивание. С течением времени раствор синеет.
Химизм реакции: 
Опыт 3. Ксантопротеиновая реакция открывает ароматические аминокислоты: триптофан, фенилаланин, тирозин и др.
Порядок выполнения опыта. К 5 каплям раствора белка добавляют 3 капли концентрированной азотной кислоты и осторожно кипятят. Вначале появляется осадок свернувшегося белка, который при нагревании окрашивается в желтый цвет. После охлаждения в пробирку наливают по каплям 10%-ный раствор едкого натра до появления оранжевого окрашивания натриевой соли динитротирозина.
Химизм реакции. Реакция обусловлена нитрованием бензольного кольца аминокислот с образованием нитросоединений желтого цвета. При подщелачивании возникает хиноидная структура, окрашенная в оранжевый цвет.
Опыт 4. Реакция Милона является специфической реакцией на тирозин. Белки, не содержащие тирозина, этой реакции не дают.
Порядок выполнения опыта. К 5 каплям раствора белка приливают 3 капли реактива Миллона (состоящего из смеси азотнокислых и азотистокислых солей закиси и окиси ртути, растворенных в концентрированной азотной кислоте). Появляется осадок белка, принимающий при нагревании кирпично-красный цвет. Следует избегать прибавления избытка реактива Миллона, поскольку он содержит азотную кислоту, которая при взаимодействии с белком может дать желтое окрашивание (ксантопротеиновую реакцию), маскирующее реакцию Миллона.
Химизм реакции
Опыт 5. Реакция Фоля указывает на присутствие в белке цистеина и цистина, содержащих слабосвязанную серу. Метианин также содержит серу, но этой реакции не дает, поскольку сера связана в нем прочно.
Порядок выполнения опыта. К 5 каплям раствора белка прибавляют 5 капель 30%-ного раствора гидроксида натрия и 1 каплю 5%-ного раствора уксуснокислого свинца, кипятят и дают постоять 1-2 мин, после чего появляется бурый или черный осадок сульфида свинца.
Химизм реакции:
Опыт 6. Реакция Адамкевича обусловлена наличием в белке аминокислоты триптофана.
Порядок выполнения опыта. В пробирку наливают 5 капель яичного или пшеничного белка или раствора желатины, добавляют 5 капель концентрированной уксусной кислоты, слегка нагревают и затем подслаивают равным объемом концентрированной серной кислоты. На границе двух слоев появляется красно-фиолетовое кольцо, постепенно распространяющееся на всю жидкость.
Химизм реакции. Триптофан, присутствующий в белке, реагирует с глиоксиловой кислотой, присутствующей в виде примеси в концентрированной уксусной кислоте, образуя окрашенный продукт конденсации. Концентрированная серная кислота принимает участие в реакции в качестве водоотнимающего средства. Интенсивность окраски зависит от количества триптофана в белке. В яичном и соевом белке его в два раза больше, чем в пшеничном, в желатине триптофан отсутствует. При использовании вместо уксусной кислоты тростникового сахара (в этом случае реакция называется по имени Шульца _ Распайля) в реакции принимает участие оксиметилфурфурол, образующийся из фруктозы.
Опыт 7. Реакция Сакагучи обусловлена присутствием в белке аминокислоты аргинина, имеющей в своем составе гуанидиновую группировку.
Порядок выполнения опыта. В пробирку помещают 5 капель яичного или пшеничного белка и добавляют 5 капель 10%-ного раствора едкого натра и 3 капли 0,1%-ного спиртового раствора a-нафтола и 1-5 капель 2%-ного раствора гипобромита натрия. Жидкость в пробирке окрашивается в красный цвет. Присутствие аммиака и избыток гипо-бромита мешают прохождению реакции
Химизм реакции. В результате реакции аргинина с a-нафтолом образуется продукт конденсации окисленного аргинина a-нафтолом. Гипобромид играет роль окислителя.
Опыт 8. Реакция Паули обусловленаприсутствием в белке аминокислот гистидина или тирозина, которые, реагируя с диазобензосульфокислотой, образуют азакраситель красного цвета.
Порядок выполнения опыта. В пробирку наливают 3 капли 1%-ной сульфаниловой кислоты, 3 капли 5%-ного раствора азотистокислого натрия и перемешивают. К полученному диазореактиву добавляют 5 капель яичного или пшеничного белка и 3-5 капель 10%-ного раствора углекислого натрия. Жидкость окрашивается в красный цвет. Если реакцию производить с раствором желатины, то окраска получается меньшей интенсивности, т.к. в желатине нет тирозина и мало гистидина. Описанная реакция может быть выполнена иным путем. К небольшому количеству приготовленного диазореактива добавляют 5 капель 10%-ного раствора соды и осторожно по стенке пробирки наслаивают раствор белка. На границе двух жидкостей появляется красное кольцо. При смешивании вся жидкость окрашивается в оранжевый или желтый цвет.
Химизм реакции основан на образовании азокрасителя
Реакция Паули не является строго специфичной для гистидина и тирозина, так как ее вызывают любые вещества, имеющие в своей структуре фенольное, имидазольное или тиазольное кольцо (адреналин, тиамин, гистамин и др.). Однако все они отсутствуют в белке и не мешают реакции.
Опыт 9. Нитропруссидная реакция обусловлена присутствием в белке серусодержащих аминокислот, которые при кипячении со щелочью разрушаются, образуя сернистый натрий. Нитропруссид натрия [NaFe+3(CN)5 NO] при взаимодействии с сернистым натрием превращается в соединение, окрашенное в красный цвет.
Порядок выполнения опыта. В пробирку помещают 5 капель раствора яичного или пшеничного, или соевого белка, 5 капель 10-30%-ного раствора щелочи и кипятят несколько минут. После охлаждения добавляют 1-3 капли нитропруссида натрия. В пробе с яичным или пшеничным белком получается красное окрашивание, исчезающее при стоянии. В пробе с раствором желатины жидкость окрашивается в желтый цвет.
Химизм реакции детально не установлен. Белки, не содержащие цистина, цистеина и метионина или содержащие их в небольшом количестве, нитропруссидную реакцию не дают.
