2018-03-09
173
Приложение 1
Занятие 1. Иммунограмма в клинической практике. Аллергодиагностика
1. Организация иммунологической лаборатории
2. Показания к назначению иммунологического обследования
3. Оценка системы фагоцитоза
4. Фенотипирование клеток иммунной системы
5. Методы определения иммуноглобулинов
6. Аллергодиагностикаinvivo и invitro
Иммунограмма – набор тестов, позволяющих оценить звенья иммунной системы.
Выделяют четыре группы заболеваний иммунной системы, при которых показано иммунологическое обследование:
ü иммунодефициты;
ü аутоиммунные заболевания;
ü аллергические заболевания;
ü лимфопролиферативные заболевания.
Наибольшее значение иммунодиагностика имеет при иммунодефицитах,которыеподразделяют напервичные и вторичные.
В соответствии с российскими рекомендациями (Р.В. Петров, Б.В. Пинегин, 1984, 2014 гг) все методы иммунодиагностики разделены на тесты I и II уровня. Тесты I уровня направлены на идентификацию грубых дефектов иммунной системы и позволяют осуществить диагностику основных первичных иммунодефицитов. Тесты II предназначены для углубленного изучения функционального состояния иммунной системы и применяются для выявления причин вторичной иммунной недостаточности. При этом их объем для каждого конкретного случая должен быть строго индивидуален.
Диагностика нарушений фагоцитоза
Фагоцитоз – комплекс клеточных реакций, направленных на распознавание, поглощение и элиминацию из организма корпускулярных частиц размером более 0,5 мкм. Процесс фагоцитоза состоит из следующих стадий: хемотаксис, адгезия, поглощение, киллинг и переваривание объекта.
Для оценки хемотаксиса определяют рецепторы на поверхности фагоцитов к хемокинам (ИЛ8).
Для оценки адгезивных свойств определяют молекулы адгезии на поверхности фагоцитов с помощью моноклональных АТ (CD18, CD11a, CD11b, CD11c, CD62L, CD62E) методом проточной цитометрии.
Для оценки стадии поглощения выявляют процент нейтрофилов, способных поглощать корпускулярные антигены. В качестве объекта фагоцитоза (тест система) используют бактерии, дрожжевые грибы или синтетические частицы.Метод исследования: микроскопический.
Одним из распространенных методов оценки стадии переваривания является НСТ-тест.
НСТ-тест основан на способности частиц нитросинеготетразолия, поглощенных нейтрофилом, менять окраску под действием активных форм кислорода. Тест выявляет процент нейтрофилов с активными формами кислорода. Метод исследования: микроскопический. Норма: 4-10%. НСТ-тест повышен при острых бактериальных инфекциях.
НСТ-тест стимулированный (фагоцитарный резерв) отражает потенциальную способность нейтрофилов продуцировать активные формы кислорода в ответ на антигенное раздражение. Норма (фагоцитарный резерв) 2,4-3,5.
Снижение показателей фагоцитоза отмечается при миелолейкозе, сахарном диабете, иммуносупрессивной терапии, сепсисе,может проявляться рецидивирующими гнойно-воспалительными процессами, пиогенными инфекциями кожи.
Диагностика нарушений клеточного звена. (Фенотипирование лимфоцитов)
Согласно рекомендациям ВОЗ оценка популяционного состава лимфоцитов имеет диагностическое значение при первичных и вторичных иммунодефицитах, лимфопролиферативных заболеваниях и ВИЧ-инфекции.
Под световым микроскопом все лимфоциты выглядят одинаково, однако их можно отличить по антигенам клеточной поверхности, их обозначают CD-молекулами (СD1, СD2, СDЗ и т.д. до СD130) и выявляют с помощью моноклональных антител. Набор антигенов зависит от типа клеток и их функций. В соответствии с общепринятой в мире СD-кластерной классификацией маркером всех Т-лимфоцитов считают CD3, маркером Т-хелперов CD4, маркером Т-киллеров/цитотоксических CD8 и т.д.
Метод исследования: проточнаяцитофлуориметрия с использованием меченых флуорохромными красителямимоноклональных антител к специфическим поверхностным маркерам этих клеток и последующей автоматической регистрацией.
Т-лимфоциты (CD3). Норма – 55-80% (0,80-2,00*109/л)
УровеньCD3+повышен – начальный период острогоинфекционно-воспалительного процесса (чаще вирусной этиологии).
Уровень CD3+снижен – первичные и вторичные иммунодефициты с нарушением Т-клеточного звена иммунитета;
Активированные Т-лимфоциты (СD25, НLA-DR). Норма – 3-12%.
Активационные маркеры – CD25, НLA-DR. появляются на Т-лимфоцитах, находящихся в стадии активации и могут быть использованы для диагностики, оценки активности иммунопатологических заболеваний, мониторинга лечения.
УровеньCD3+CD25+, CD3+НLA-DR+повышен– активация иммунного ответа: острый или хронический воспалительный процесс.
Уровень CD3+CD25+, CD3+НLA-DR+ снижен – иммунодефициты с нарушением Т-клеточного звена иммунитета.
Т-хелперы (CD3CD4) Норма – 31-49% (0,60-1,60*109/л)
УровеньCD3+CD4+повышен – острый инфекционно-воспалительный процесс, обострение аллергических иаутоиммунных заболеваний.
УровеньCD3+CD4+снижен –врожденные и приобретенные иммунодефициты.
Т-цитотоксические (Т-киллеры)(CD3CD8) Норма – 12-30% (0,45-0,85*109/л)
УровеньCD3+CD8+повышен – инфекции, вызванные внутриклеточными паразитами(вирусы, бактерии, грибы, простейшие).
УровеньCD3+CD8+снижен – первичные и вторичные иммунодефициты, прогрессирующие злокачественные новообразования, длительное лечение цитостатиками, гомонами, иммунодепрессантами.
Иммунорегуляторный индекс
При некоторых заболеваниях диагностическое и прогностическое значение имеет соотношение CD4/CD8 или иммунологический индекс (ИРИ). Норма: 1,2-2,5.
CD4/CD8 (ИРИ) повышен – аутоиммунные заболевания, острый Т-лимфобластный лейкоз, тимома.
CD4/CD8 (ИРИ) снижен – вирусные инфекции, хронические заболевания, опухоли. Величина ИРИ менее 1 косвенно соответствует иммунодефициту.
Натуральные киллеры (НK-клетки, CD16CD56)
НK-клетки – большие гранулярные лимфоциты, лизирующие клетки - мишени, инфицированные вирусами, внутриклеточными возбудителями, а также опухолевые клетки, без специфического распознавания, необходимого для Т-киллеров.
Уровень НK-клеток (CD3+-CD16+CD56+)повышен – острый воспалительный процесс, бронхиальная астма, злокачественные новообразования, лейкоз.
Уровень НK-клеток(CD3-CD16+CD56+)снижен – врожденные иммунодефициты, аутоиммунные заболевания, опухоли, стресс, прием цитостатиков и кортикосероидов.
