Методические указания

Воздух не является благоприятной средой для жизнедеятельности микроорганизмов. Однако, попадая в воздух, многие микроорганизмы способны какое-то время находиться в жизнеспособном состоянии. Среди них большая группа патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Человек, болеющий инфекциями верхних дыхательных путей, выделяет микроорганизмы при разговоре, чихании, кашле и т.д. Через воздух передается группа заболеваний, которая так и называется - инфекции дыхательных путей с воздушно-капельным и воздушно-пылевым механизмами передачи. К таким инфекциям относятся грипп, корь, коклюш, скарлатина, дифтерия, натуральная оспа, легочная форма чумы, менингит, туберкулез, ветряная оспа, паротит и другие.

Задачами санитарно-микробиологического исследования воздуха являются гигиеническая и эпидемиологическая оценка воздушной среды, и, как следствие, разработка комплекса мероприятий, направленных на профилактику аэрогенной передачи возбудителей инфекционных болезней. Объектами санитарно-микробиологического исследования воздуха закрытых помещений являются: воздух больниц (операционные, отделение реанимации, родильные залы роддомов, и т.п.), детских садов, школ, поликлиник, аптек, производственных цехов и вспомогательных помещений на предприятиях различного профиля (пищевых, микробного синтеза и т.п.), а также мест массового скопления людей - кинотеатров, спортивных залов и т. д.

Санитарно-микробиологическое исследование атмосферного воздуха в крупных городах проводится в плановом порядке и в некоторых случаях по эпидемическим показаниям. Исследование атмосферного воздуха в местах орошения земледельческих полей сточными водами методом дождевания проводится с целью обнаружения микроорганизмов p.p.Salmonella, Escherichia.

При оценке санитарного состояния закрытых помещений в зависимости от задач исследования определяется общая бактериальная обсемененность (общее микробное число), присутствие санитарно-показательных микроорганизмов (стафилококков, а- и р -гемолитических стрептококков), а также непосредственно патогенных микроорганизмов (в зависимости от характера помещений - микобактерий туберкулеза, коринебактерий дифтерии, дрожжей и мицелиальных грибов и пр.).

При исследовании воздуха на предприятиях пищевого профиля, общественного питания помимо показателя общей обсемененности определяют те группы микроорганизмов, которые являются характерными возбудителями порчи данных видов продукции или могут встречаться в данном производственном помещении (дрожжи и грибы - в холодильниках, стафилококки - в цехе производства мороженого и т.п.).

При изучении присутствия микроорганизмов различных физиологических групп в воздухе используют питательные среды разного назначения (как стандартные, так и элективные или дифференциально-диагностические), в зависимости от цели исследования. Методы отбора проб воздуха и приборы.

Санитарно-микробиологическое исследование воздуха можно разделить на 4 этапа:

1) отбор проб;

2) обработка, транспортировка, хранение проб, получение концентрата микроорганизмов (если необходимо);

3) бактериологический посев, культивирование микроорганизмов;

4) идентификация выделенной культуры.

Отбор проб, как и при исследовании любого объекта, является наиболее ответственным. Правильное взятие проб гарантирует точность исследования. В закрытых помещениях точки отбора проб устанавливаются из расчета на каждые 20 м²площади - одна проба воздуха, по типу конверта: 4 точки по углам комнаты (на расстоянии 0,5 м от стен) и 5-я точка - в центре. Пробы воздуха забираются на высоте 1,6—1,8 м от пола - на уровне дыхания в жилых помещениях. Пробы необходимо отбирать днем (в период активной деятельности человека), после влажной уборки и проветривания помещения. Следует обратить внимание на то, что при отборе проб воздуха во многих случаях происходит посев его на питательную среду. Все методы отбора проб воздуха можно разделить на седиментационные и аспирационные.

Седиментационный - наиболее старый метод, широко распространен благодаря простоте и доступности, однако является неточным. Метод предложен Р. Кохом и заключается в способности микроорганизмов под действием силы тяжести и под влиянием движения воздуха (вместе с частицами пыли и капельками аэрозоля) оседать на поверхность питательной среды в открытые чашки Петри. Чашки устанавливаются в точках отбора на горизонтальной поверхности. При определении общей микробной обсемененности чашки с мясопептонным агаром оставляют открытыми на 5 —10 мин или дольше в зависимости от степени предполагаемого бактериального загрязнения. По окончании экспозиции все чашки закрывают, помещают в термостат на сутки для культивирования при температуре, оптимальной для развития выделяемого микроорганизма, затем (если этого требуют исследования) на 48 ч оставляют при комнатной температуре для образования пигмента пигментообразующими микроорганизмами. Седиментационный метод имеет ряд недостатков: на поверхность среды оседают только грубодисперсные фракции аэрозоля; нередко колонии образуются не из единичной клетки, а из скопления микробов; на применяемых питательных средах вырастает только часть воздушной микрофлоры. К тому же этот метод совершенно непригоден при исследовании бактериальной загрязненности атмосферного воздуха. Более совершенными методами являются аспирационные, основанные на принудительном осаждении микроорганизмов из воздуха на поверхность плотной питательной среды или в улавливающую жидкость (мясо-пептонный бульон, буферный раствор, изотонический раствор хлорида натрия и др.).

Для снижения численности микроорганизмов в воздухе закрытых помещений применяют следующие средства:

а) химические - обработка озоном, двуокисью азота, распыление молочной кислоты,

б) механические - пропускание воздуха через специальные фильтры,

в) физические - ультрафиолетовое облучение.

Исследование воздуха проводят не реже одного раза в месяц.

Ход работы

Чашки Петри с мясопептонным агаром (для выращивания бактерий) и сусло-агаром (для выращивания грибов и дрожжеподобных микроорганизмов) оставляют открытыми 5, 10 или 15 мин (время экспозиции) в зависимости от загрязненности воздуха. Затем их закрывают крышками, переворачивают вверх дном и выдерживают в термостате при температуре (30)± 1^о С в течение 48 ч для определения общего количества бактерий или при (24^оС в течение 5 – 7 дней для выявления дрожжей и плесневых грибов. Затем производят подсчет выросших колоний визуально или с помощью счетной камеры, полагая, что каждая колония выросла из одной осевшей микробной клетки.

Для расчета количества микробов в 1 м³ используют формулу Омелянского, согласно которой на поверхность чашки площадью 100 см² в течение 5 мин оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 дм³ воздуха.

Количество микроорганизмов (Х) в 1 м³ воздуха рассчитывают по формуле (4):

Х = А ·100·5·100/(B t), (4)

где А - число колоний, выросших в чашке, Петри (среднее из двух);

В – площадь поверхности чашки, см²;

t - время, экспозиции, мин;

100 - число для пересчета площади чашки на 100 см²;

5 - экспозиция чашки по Омелянскому, мин;

100 - число для пересчета 10 дм³воздуха на 1 м³.

Пользуясь этим методом, мы можем иметь только приблизительное представление о нахождении микробов в воздухе, так как он не учитывает скорости движения воздуха и других факторов. Если в среднем на одной чашке Петри выросло до 200 колоний, воздух считается чистым, свыше 200 колоний – загрязненным.

Чистоту воздуха оценивают по числу колоний, выросших в чашке Петри, сопоставляя полученные результаты с примерными микробиологическими показателями (таблица 10).

Таблица 10 Оценка воздуха помещений

Объект анализа	Отлично			Хорошо			Удовлетворительно
Объект анализа	КОЕ бактерий	КОЕ плесеней	КОЕ дрожжей	КОЕ бактерий	КОЕ плесеней	КОЕ дрожжей	КОЕ бактерий	КОЕ плесеней	КОЕ дрожжей
Воздух цеховых помещений	До 20	-	-	20-50	До 5	До 5	50-70	До 5	До 5
Воздух остальных помещений предприятий	До 30	До 5	-	30-70	5-10	До 5	70-100	10-15	5-10