Методические указания к выполнению работы

Коли-индекс - количество особей E.coli, обнаруженной в 1 л воды.

Для анализа отбирают различные объемы воды, регламентированные ГОСТ 18963-73 в зависимости от предполагаемого количества БГКП в пробе воды. Исследуемую воду фильтруют в фильтровальном аппарате, например в аппарате Зейтца через мембранные фильтры № 2 или № 3, а также планктонные фильтры № 6. Фильтровальный аппарат стерилизуют фламбированием после обработки ватным тампоном, смоченным спиртом. Подго­товленный фильтр помещают на стерильный столик фильтровального аппарата и закрепляют верхней частью аппарата (воронкой, цилиндром).

Вода фильтруется с помощью водоструйного насоса или аппарата Комовского. После фильтрования фильтр стерильным пинцетом переносят, не пе­реворачивая, на среду Эндо, в чашку Петри. Фильтр должен плотно прилегать к поверхности питательной среды. На дне чашки Петри ставят номер пробы, объем профильтрованной воды, дату посева и помещают в термостат при температуре 37°С на сутки. За это время из осевших на фильтре бакте­рий образуются колонии. Учитывают колонии, характерные для кишечных палочек (темно-красные с металлическим блеском и без него, розовые про­зрачные). Из нескольких колоний различных оттенков готовят мазки и ок­рашивают их по Граму. В случае присутствия нетипичных кишечных пало­чек (короткие или длинные, полиморфные) дополнительно проводят оксидазный тест, который позволяет отличить бактерии семейства Enterobacteriaсае от других грамотрицательных бактерий. С этой целью мембранный фильтр с колониями бактерий помещают на больший по размеру диск фильтровальной бумаги, смоченный реактивом - раствором фенилендиамина. Результат реакции учитывают через 2-4 мин. колонии бак­терий, не относящиеся к семейству Enterobacteriaceae, дают положительную реакцию на оксидазу в виде посинения колоний или появления синего обод­ка. Колонии, не изменившие окраску и состоящие из грамотрицательных па­лочек, относят к колониям БГКП, так как у них отсутствует оксидазная активность.

Результат анализа выражают в виде коли-индекса, который высчитывают, умножая количество выросших на фильтре колоний БГКП на 1000 и делят на объем профильтрованной воды. Если в I л питьевой воды содержится бо­лее 3 БГКП, а в 1 л воды бассейнов - более 10, то это свидетельствует о фе­кальном загрязнении, превышающем норму.

Задание 5. Определить в воде индекс энтерококка: сделать посевы исследуемой воды на щелочную элективную среду (табл. 8).

Материалы и оборудование. Колба с исследуемой водой - 50 мл пробирки с разведенной водой в 10 и 100 раз (приготовленные при определении микробного числа воды), пробирки с щелочно-элективной средой по 5 мл, гашетки на 1-2 мл.

Методические указания к выполнению работы.

1 этап. Определение индекса энтерококка, т. е. количество энтерококков в 1 л во­ды, проводится параллельно с определением микробного числа и индекса БГКП путем посев различных объемов воды на жидкую щелочную элективную среду с полимиксином. Высокая элективность среды дости­гается установлением рН 10-10,2 и применением полимиксина, подавляю­щих рост посторонних бактерий. Посевы помещают в термостат при тем­пературе 37°С на 48 ч.

Таблица 21

Определение индекса энтерококка в воде

2 этап. Продолжить определение индекса энтерококков воды (II этап): отметить в табл. 4 результаты посева воды на щелочно-элективной среде, произвести высев с нее на сектора молочно-ингибиторной среды.

Из всех пробирок с посевом воды на щелочно-элективной среде делают высев секторами в чашку Петри с молочно-ингибиторной средой. Посевы помещают в термостат на сутки. Ход исследования записывают в табл..

III. МЕТОДЫ ПРЯМОГО ОБНАРУЖЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ В ВОДЕ

Задание 6. Изучить методы исследования воды на наличие сальмонелл.

Материалы и оборудование. Колбы с исследуемой водой - 500 мл и 200 мл, колбы с 10% пептонной водой - 10 мл и селенитовой средой - 200 мл.