Методы специфической лабораторной диагностики

2 3 4 5 6 7 8

Основными показаниями для назначения лабораторных методов аллергодиагностики, которые проводятся in vitro, являются:

· ранний детский возраст до 3-х лет;

· пациенты с высокой степенью сенсибилизации;

· непрерывно рецидивирующее течение заболевания без периодов ремиссии;

· невозможность отмены антигистаминных и других препаратов;

поливалентная сенсибилизация, когда отсутствует возможность проведения тестирования in vivo сразу со всеми предполагаемыми аллергенами в ограниченные сроки обследования;

· резко измененная реактивность кожи;

· ложноположительный или ложноотрицательный результат при кожном тестировании;

· уртикарный дермографизм.

Основными преимуществами методов специфической диагностики in vitro являются:

безопасность для больного;
возможность проведения исследования в случае, когда пациент находится от аллерголога на большом расстоянии и доставлена лишь сыворотка больного;
небольшое количество крови для исследования.

В клинической практике наиболее широко используются следующие методы специфической диагностики, проводимые in vitro:

метод иммуноферментного анализа (ИФА) для определения специфических IgE;
радиоаллергосорбентный тест (РАСТ) для выявления специфических IgE;
непрямой базофильный тест (тест Шелли);
прямой базофильный тест (тест Шелли);
реакция специфического высвобождения гистамина из базофилов периферической крови больного (по P.Scov, S.Norne, B.Weeke).

ИФА, радиоаллергосорбентный тест, непрямой и прямой базофильные тесты являются вспомогательными методами специфической аллергодиагностики при реакциях немедленного типа.

Иммуноферментный анализ в настоящее время является одним из распространенных методов исследования. С помощью ИФА производится количественное определение аллергенспецифических IgE в крови больного. Принцип метода заключается в том, что на первом этапе исследования испытуемый аллерген ковалентно связывается с твердой фазой (бумажный диск, активированный полимер и др.). При добавлении сыворотки больного происходит связывание аллергена, фиксированного на твердой фазе, с антителом, если в сыворотке присутствуют соответствующие данному аллергену антитела. После отмывания несвязавшихся IgE добавляются антитела против IgE, меченные флуорохромом (пероксидазой хрена, бета-галактозидазой и др.). Происходит образование комплекса: аллерген на твердой фазе + специфический IgE + антитела анти-IgE (антитела против IgE). Несвязавшиеся антитела удаляются. Уровни специфического IgE-связывания определяются по интенсивности свечения (реакция оценивается в интервале 1–4 класса). Чем выше показатель свечения по отношению к негативному контролю (сыворотка, в которой отсутствуют специфические IgE-антитела), тем больше специфических IgE в сыворотке пациента. Специфический характер реакции учитывается на основе позитивного контроля (IgE-связывание интенсивностью 4 класса). Ценность этого метода состоит в том, что для его проведения сразу с большим количеством аллергенов требуется небольшое количество сыворотки.

Радиоаллергосорбентный тест (РАСТ). С помощью этого метода также производится количественное определение аллергенспецифических IgE в крови. Аллерген, соединенный ковалентно с бумажным диском, реагирует со специфическим IgE крови больного. После отмывания неспецифического IgE добавляют радиоактивно меченный (125I) анти-IgE. Образуется комплекс специфический IgE + меченый анти-IgE. Радиоактивность этого комплекса измеряют с помощью гамма-счетчика. Чем больше радиоактивность, тем выше содержание специфического IgE в крови больного. Для измерения общего и аллерген-специфических IgE используют стандартные наборы (панели) аллергенов.
Для определения IgE в сыворотках крови больных применяют методы, основанные на эффекте хемилюминесценции. Принцип постановки теста такой же, как и при ИФА и радиоаллергосорбентном тесте, однако в качестве индикатора реакции используются фотореагенты (А, B, C, D), свечение которых (тест MAST-CLA(Cl1)) регистрируется на пленке Polaroid, на люминометре, на фотометре.
Специфические антигены обнаруживают при помощи ELISA-теста.
Для диагностики аллергических реакций, протекающих по механизмам гиперчувствительности замедленного действия, например при пищевой и лекарственной аллергии, применяют тест бласттрансформации лимфоцитов

Алгоритмы и стандарты диагностики аллергического ринита

ОБСЛЕДОВАНИЕ

Обязательные лабораторные исследования

• Клинический анализ крови (при отклонении от нормы исследование повторять 1 раз в 10 дней)

• RW, ВИЧ

• Общий анализ мочи (1)

• Цитологическое исследование мазков из полости носа (1)

Дополнительные лабораторные исследования (1)

• Посев отделяемого из носа на инфекционную флору

• Биохимическое исследование крови (билирубин, АЛТ, АСТ, мочевина

крови, глюкоза)

• Цитологическое исследование биоптата