Бактериологическая оценка качества стерилизации и определение антибиотикочувствительности

Стерилизация - полное освобождение разнообразных объектов от вегетативных форм микроорганизмов и их спор с использованием в основном физических методов (термический,  лучевой  и механический).      

          Лучевая стерилизация - это применение ультрафиолетовых лучей для обеззараживания воздуха и различных предметов. Гамма– лучи применяются для стерилизации одноразовой лабораторной посуды, шприцев и др.

          Механическая стерилизация - фильтрование проводят с помощью мелкопористых фильтров разных типов, задерживающих только клеточные формы микробов и их спор (фильтры Шамберлана, Зейтца).         

     Мембранные фильтры приготавливают из нитроклетчатки.  

       Фильтрованием стерилизуют жидкие материалы, не выдерживающие нагревания (сыворотка крови, антибиотики и др.),  Фильтрование так же используют для получения бактериальных токсинов, фагов и разных продуктов жизнедеятельности бактерий.

    Многие химические соединения, оказывающие губительное действие на микроорганизмы, используются в качестве дезинфицирующих веществ и антисептиков. Дезинфекция – уничтожение патогенных микробов в объектах внешней среды с использованием химических веществ.   

   Контроль эффективности термической стерилизации проводится бактериологическим при помощи тест-микроорганизмов (спорообразующие микробы) и  физическим (термометров, специальных термоиндикаторов, меняющих цвет при определенной температуре или различных химических веществ, которые плавятся при известной температуре) способами.

     В естественных условиях обитания микроорганизмы существуют не изолированно, а находятся в сложных взаимоотношениях. Некоторые микроорганизмы в процессе жизнедеятельности вырабатывают различные вещества, оказывающие губительное действие на бактерии и другие микробы. К таким веществам относятся антибиотики.

        Антибиотики – химиотерапевтические вещества, избирательно подавляющие жизнедеятельность микроорганизмов и задерживающие развитие злокачественных новообразований.

    Антибиотики следует применять только по показаниям, когда заболевание, для лечения которого их используют, вызвано микроорганизмом, в отношении которого существуют эффективные антибиотики и определением его чувствительности к антибиотикам.

Бактериологический метод контроля эффективности стерилизации    

Исследуемый материал – спорогенная (B. anthracoides) и аспорогенная культуры(E. coli).

Ход работы:

1)Проверка культур на чистоту:

-приготовление мазка из культуры E. сoli и окраска по Грамму. E. сoli представляет собой грамотрицательные палочки, расположенные по одиночке;

-приготовление мазка из культуры B. аnthracoides и окраска по Ожешке. Bac. аnthracoides представляет собой синие палочки, расположенные в цепочку; центрально расположенные споры красного цвета (по морфологическим и тинкторальным признакам не отличается от B. anthracis).

      2) Кипячение культур в водяной бане в течение 30 минут.

      3) С целью проверки гибели микробов делаем контрольные посевы: B. аnthracoidesзасеваем на скошенный МПА,Е. сoli – на МПБ.

      4) Инкубация посевов в термостате при 37⁰ в течение 18-24час.

      5) Макроскопическое изучение посевов: на МПА отмечаем рост в виде матового налёта, желтоватого цвета; МПБ – прозрачен.

       6)При микроскопическом исследовании материала с МПА обнаруживаем стрептобациллы и споры.

      7) Оформление заключения об эффективности стерилизации.

Определение антибиотикочусвтвительности бактерий  

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом «бумажных дисков»

Биологическая активность антибиотиков выражается в международных единицах (ME). За единицу активности принимается то минимальное количество антибиотика, которое задерживает рост стандартного штамма, определенного вида микроорганизма в строго определенных условиях. Степень чувствительности к антибиотикам необходимо определять для успешного проведения лечения. Наиболее распространен метод «бумажных дисков».

Методика.

1.В чашку Петри с МПА «газоном» засевают взвесь изучаемой культуры микроба, например, S. aureus.

2. На засеянную поверхность агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные антибиотиками. Диски располагают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии от края чашки 15 мм.

3.Чашки выдерживают в термостате 18-24 часов при   37 °С.

4.Учёт результатов проводят на 2-ой день путем измерения зон задержки роста бактерий вокруг дисков. Так, зоны диаметром до 10мм указывает на отсутствие чувствительности, до 15 – слабую, до 25 – среднюю и более 25 – высокую чувствительность исследуемого микроба к антибиотику (рис.23).

5.Оформление заключения: К каким антибиотикам чувствителен возбудитель? Какой антибиотик можно рекомендовать для лечения и почему?