2020-06-12
386
Реактив I (для первичной окраски)
| Состав: | Генцианвиолет или кристаллвиолет | - | 1 г |
| Спирт этиловый 96° | - | 10 мл | |
| Фенол | - | 2 г | |
| Вода дистиллированная | - | 100 мл |
Приготовление: в ступке растворяют краситель с фенолом, постепенно добавляя спирт и воду, сливают во флакон, выдерживают сутки и затем фильтруют через бумажный фильтр.
Реактив 2. Раствор Люголя (в модификации Грама)
| Состав: | Калий йодид (KI) | - | 2 г |
| Йод кристаллический | - | 1 г | |
| Вода дистиллированная | - | 300 мл |
Приготовление: йод и иодид калия растворяют в 10 мл воды, оставляют на сутки в мерной колбе, после чего добавляют воду до 300 мл.
Реактив 3. Спирт этиловый 96°
Реактив 4. Фуксин карболовый, разведенный
| Состав: | а) Фуксин основной | - | 10 г |
| Спирт этиловый 96° | - | 100 мл |
Ингредиенты смешивают и ставят в хорошо закрытом флаконе в термостат на 18-20 часов.
| б) Фенол | - | 5 г | |
| Вода дистиллированная | - | 100 мл |
Приготовление: 10 мл спиртового раствора основного фуксина (а) добавляют к 100 мл 5% водного раствора фенола (б), получается крепкий карболовый фуксин, который для работы разводят дистиллированной водой 1:10.
Определение эпидемиологических маркеров штаммов энтеробактерий
Для усовершенствования методов эпидемиологического обследования и анализа при инфекциях, вызываемых энтеробактериями, характеризующихся большой сложностью и многообразием форм проявления эпидемического процесса, особое значение имеет внутривидовая (внутрисероваровая) дифференциация возбудителей - их эпидемиологическое маркирование.
В основу дифференциации (определения эпидмаркеров) могут быть положены различные свойства микроорганизмов, характеризующиеся стабильностью: биохимические свойства (биовары), антигенная структура (серовары), чувствительность к бактериофагам (фаговары), колициногенная активность (колициногеновары) или чувствительность к колицинам (колициновары), присутствие в штаммах факторов устойчивости к химиотерапевтическим препаратам (R-плазмид определенного типа) и др. У отдельных возбудителей возможно определение ряда эпидмаркеров.
Определение сероваров у некоторых условно-патогенных энтеробактерий
Определение сероваров цитробактеров
Определение сероваров возможно у C. freundii при помощи специфических O- и H-сывороток в реакции агглютинации на стекле в соответствии с антигенно-диагностической схемой этих бактерий (таб. 34).
Таблица 34. Антигенно-диагностическая схема представителей рода Citrobacter
| O-группа | O-антигенный комплекс | H-антиген |
| 1 | 2 | 3 |
| 01 | 1a, 1b, 1c, 1 | 1, 2; 14, 15, 16; 21, 25, 26; 21, 25, 27; 39 |
| 02 | 2а, 1b | 1, 2, 4, 5, 6; 7, 8, 10; 8, 10, 11; 14, 15, 16; 13, 17; 21, 22; 23, 28; 32, 34; 35, 37; 39 |
| 03 | 3a, 3b и 1c | 4, 5; 5, 6; 7, 8, 10; 8; 8, 9; 9, 13, 14; 14, 15, 16; 13, 17; 21, 22; 21, 23; 21, 24; 21, 25; 27, 9, 29, 30; 9, 29, 31; 32, 33; 32, 34; 39; 47; 90 |
| 04 | 4a, 4b | 4, 5; 5, 6; 7, 8, 10; 9, 13, 14; 13, 18, 19; 19, 20; 9, 29, 30; 9, 29, 31; 32, 34; 44, 45; 44, 46; 95 |
| 05 | 5a, 5b, 4b | 53, 54; 63, 73; - |
| 06 | 6, 4b, 5b | 72; 54 |
| 07 | 7, 3b, 1c | 4, 5; 7, 8, 10; 8, 9; 9, 13, 14; 21, 22; 21, 23; 21, 25, 27; 32, 33, 39; 68 |
| 8a, 1 | 1, 2; 5, 6; 8, 12; 9, 13, 14; 9, 13, 15; 21, 22; 21, 25, 27; 9, 29, 30; 32, 33; 39, 53, 55; 67 | |
| 08 | 8a, 8b | 1, 2; 8, 12; 9, 13, 14; 21, 25, 26; 21, 25, 27; 35; 37 |
| 8a, 8c | 5, 6; 9, 13, 14; 13, 17; 21, 25, 27; 32, 33; 35, 37; 76 | |
| 09 | 9a, 9b | 1, 2; 2, 3; 4, 5; 8, 9; 13, 17; 21, 25, 26; 32, 33; 32, 34; 39, 48 |
| 010 | 10, 9b | 13, 17; 9, 29, 30; 48; - |
| 011 | 11 | 9, 13, 14; 14, 15, 16; 32, 33; 35, 37; 35, 36; 38; 77, 78; 83 |
| 012 | 12a, 12b | 5, 6; 13, 17; 35, 36; 57; 9, 29, 31; |
| 12a, 12c | 62, 57 | |
| 013 | 13 | 5, 6; 59; 65; 66; 69 |
| 014 | 14 | 40, 41; 61 |
| 015 | 15 | 13, 18, 19; 21, 22; 32, 34 |
| 016 | 16 | 21, 24; 58 |
| 017 | 17 | 21, 24; 44, 45; 75 |
| 018 | 18 | 56 |
| 019 | 19 | 14, 15, 16; 87; 74 |
| 020 | 20 | 40, 41, 3 |
| 021 | 21a, 21b | 60; 9, 29, 31; 40, 41; 44, 45; 53, 54; 21, 24 |
| 022 | 22 | 64 |
| 023 | 23 | 52; 41, 97 |
| 024 | 24 | 49, 51; 85 |
| 025 | 25 | 35, 36, 38 |
| 026 | 26 | 49, 50; 59 |
| 027 | 27 | 40, 41 |
| 028 | 28, 1c | 70 |
| 029 | 29 | 8, 10, 11; 40, 42; 74; 75; 77, 78; 77, 79; 77, 80; 77, 88; 82; 83; 84; 85; 96; 87; - |
| 030 | 30, 21b | 76; 35, 37; 89 |
| 031 | 31 | 71 |
| 032 | 32 | 23, 28 |
| 033 | 33 | 87 |
| 034 | 34 | 68 |
| 035 | 35 | 91 |
| 036 | 36 | 35, 36; 54, 78 |
| 037 | 37 | 1, 5* |
| 038 | 38 | 92 |
| 039 | 39 | 61; 94 |
| 040 | 40 | 76 |
| 041 | 41 | 98 |
| 042 | 42 | 68; 98 |
______________________________
* H-антиген идентичный H-1,5 сальмонелл.
Первоначально культуру испытывают поливалентными O-сыворотками: CiOA, CiOB, CiOC, CiOD, CiOG, каждая из которых включает антитела к ряду O-групп. Например, CiOA содержит антитела к группам 01, 02, 03, 04, 05, 06, 08; CiOB - 09, 010, 011, 012, 013, 014 и т.д. (см. "Наставление по применению O-сывороток для идентификации бактерий Цитробактер").
При работе с поливалентными сыворотками целесообразно начинать с сывороток CiOA, CiOB, CiOF в связи с большей частотой распространения в стране представителей соответствующих серогрупп. При положительном результате реакции агглютинации с одной из поливалентных сывороток продолжают серологическую идентификацию культур с сыворотками к O-антигенам, входящим в состав поливалентной смеси. При наличии положительной реакции агглютинации с одной из указанных сывороток устанавливают серологическую O-группу штамма. При агглютинации культуры одновременно с двумя или тремя поливалентными O-сыворотками, содержащими общие антитела, культуру дополнительно испытывают с соответствующими факторными сыворотками и на основании полученных данных определяют антигенное строение штамма. После установления O-группы определяют H-антиген с использованием поливалентных и моновалентных H-сывороток. Для определения O- и H-антигена в реакции агглютинации на стекле используют 18-20-часовую культуру, на СПА проводят реакцию общепринятым способом.
Определение сероваров протеев
Определение сероваров возможно P. vulgaris и P. mirabilis при помощи специфических O- и H-сывороток в реакции агглютинации на стекле в соответствии с антигенно-диагностической схемой этих бактерий (табл. 35) и "Наставлением по применению агглютинирующих диагностических протейных O- и H-сывороток". Для реакции агглютинации применяют суточную культуру на СПА, которую испытывают вначале с поливалентными, а затем при положительной реакции агглютинации с моновалентными O-сыворотками, входящими в поливалентную. После установления O-группы определяют H-антиген, применяя вначале поливалентные, а затем моновалентные H-сыворотки.
