2020-07-12
261
Цель занятия:
- изучить методики определения яиц гельминтов;
- изучить амбарных вредителей.
Анализ на гельминты
1 Флотационные методы определения наличия яиц и личинок гельминтов
Сущность методов
Флотационные методы основаны на определении наличия яиц нематод, цестод некоторых трематод, личиночных стадий паразитических и свобод но живущих нематод, а также члеников и половозрелых форм, всплывающих на поверхность флотационного раствора с испытуемым материалом, с помощью микроскопа.
При определении наличия яиц нематод, цестод и трематод под микроскопом используют соответствующий атлас яиц гельминтов.
2. Метод Фюллеборна для диагностики нематодозов и цестодозов
Анализируемую пробу массой 1 г заливают в ступке 3—5 см3 насыщенного раствора хлористого натрия тщательно размешивают пестиком или стеклянной палочкой и по мере размешивания добавляют раствор, доводя объем до 15 см3. Затем процеживают через сито в чистый стакан и отстаивают в течение 40 мин. За время флотации яйца нематод и цестод, удельный вес которых меньше веса насыщенного раствора хлористого натрия, всплывают на поверхность и концентрируются на поверхностной пленке.
Затем, прикасаясь металлической петлей к разным местам поверхностной взвеси, снимают три капли раствора и наносят на предметное стекло, и исследуют под микроскопом. Для недопущения быстрого высыхания и кристаллизации капель на предметных стеклах к ним добавляют по небольшой капле 50 %*ного водного раствора глицерина.
Металлическую петлю обжигают над пламенем спиртовки в начале и конце испытаний. При массовых исследованиях каплю на предметном стекле покровным стеклом не накрывают, а металлическую петлю промывают резкими движениями в стаканчике с дистиллированной водой.
3 Седиментационные методы диагностики трематодозов
Сущность методов
Седиментационные методы основаны на осаждении яиц гельминтов в процессе обработки проб дистиллированной водой или другими жидкостями и исследовании осадка.
Данные методы применяют для диагностики трематодозов, реже — других гельминтозов.
3.3 Метод последовательного промывания для диагностики фасциолеза, парамфистоматоэа, дикроцепиоза и других гельминтозов
Анализируемую пробу массой З г помещают в стакан вместимостью 50—100 см3, вливают небольшое количество дистиллированной воды и палочкой размешивают до получения жидкой кашицеобразной массы, затем добавляют дистиллированную воду порциями до объема 50 см3 при постоянном размешивании.
Смесь фильтруют, пропуская через ситечко в другой стакан, и отстаивают в течение 5 мин до образования осадка, после чего верхний слой жидкости сливают до осадка, а к осадку добавляют снова такое же количество дистиллированной воды и отстаивают в течение 5 мин после чего жидкость снова сливают до осадка.
Такие операции повторяют до тех пор, пока надосадочный слой воды не будет прозрачным. Последний раз верхний слой сливают или отбирают спринцовкой, опустив наконечнике стакан, не доводя до дна 1,5—2,0 см, а осадок поочередно разливают на часовые или предметные стекла и исследуют под микроскопом.
4 Метод Болховитинова для выявления яиц трематод
В лабораторные пробирки наливают по 6—8 см3 насыщенного раствора хлорида натрия и вставляют в штатив наклонно, помещая нижний конец пробирки в гнездо, не противоположное верхнему отверстию, а в соседнее.
Анализируемые пробы массой 1—2 г тщательно размешивают в ступке с 10—15 см3 дистиллированной воды комнатной температуры. Затем медленно по стенкам воронки через двойной слой марли процеживают содержимое из ступки в пробирку таким образом, чтобы смесь оказалась в поверхностном слое раствора соли.
Рекомендуемое время отстаивания — 30—90 мин. За это время тяжелые яйца трематод оседают на дно пробирки. Затем верхний слой сливают, а осадок помещают на часовое или предметное стекло и исследуют под микроскопом.
