Методы гельминтолярвоскопии

ЭКЗАМЕНАЦИОННЫЙ БИЛЕТ № 3

1. Трипаносомозы. Морфология, классификация, особенности биологии.

2. Гельминтоларвоскопия. Методы исследования.

3. Цистицеркоз овец (диагностика, профилактика и меры борьбы).

 

Трипаносомозы. Морфология, классификация, особенности биологии.

Морфологические особенности.

В цикле развития трипаносом существует 3 стадии:

1 Трипомастигота имеет удлиненную форму, длинный жгутик, ундулирующую мембрану. Длина 13-40 мкм. Подвижна, паразитирует в организме позвоночных хозяев (человек, животные). Является инвазионной стадией.

2 Эпимастигота характерен более короткий жгутик, ундулирующая мембрана выражена слабо. Существует в организме переносчика, способна переходить в трипомастиготу.

3 Амастигота – неподвижна, отсутствуют жгутик и ундулирующая мембрана. Внутриклеточный паразит позвоночных, способна переходить в трипомастиготу.

Классификация трипаносом упорядочена С. А. Ноаге (1966). На основании объективных морфологических признаков и особенностей жизненного цикла он разделил трипаносом млекопитающих на две биологические группы: Stercoraria и Salivaria, с выделением в каждой из них подродов.

Группа Stercoraria включает три подрода, представители которых развиваются в кишечнике переносчика и передаются путем контаминации. Метациклические формы имеют свободный жгутик и большой нетерминальный кинетопласт. Размножение в трипамастиготной (трипаносомной) стадии прерывается в позвоночном хозяине и продолжается в эпимастиготной (критидиальной) и амастиготной (лейшманиальной) стадиях. Большинство видов этой группы непатогенно.

Подрод Megatrypanum — большие трипаносомы, кинетопласт расположен вблизи ядра, субтерминально. Типичный вид — Т. (Megatrypanum) theileri. Подрод Herpetozoma — трипаносомы средних размеров с острым задним концом и субтерминально расположенным кинетопластом. Типичный вид —Т. (Herpetoasoma) lewisi. Подрод Schizotrypanum — небольшие изогнутые трипаносомы с крупным кинетопластом, расположенным терминально. Типичный вид — Т. (Schizotrypanum) cruzi, патогенный для человека.

Группа Salivaria представлена видами, развитие которых заканчивается в хоботке или слюнных железах переносчика и передается путем инокуляции. Это типично метациклические трипаносомы, имеют свободный жгутик или он отсутствует, кинетопласт терминальный или субтерминальный. Задний конец утолщен. В позвоночном хозяине размножаются непрерывно в трипамастиготной стадии. Все виды этой группы патогенные. Включают четыре подрода.

Подрод Duttonella (бывшая группа vivax) — мономорфные трипаносомы со свободным жгутиком и расширенным задним концом. Кинетопласт большой, обычно терминальный. Развиваются в хоботке мухи цеце, могут передаваться и механическим путем. Типичный вид — Т. (Duttonella) vivax.

Подрод Nannomonas (бывшая группа congolense) — небольшие трипаносомы, обычно без свободного жгутика, кинетопласт средний, расположен маргинально. Развиваются в хоботке и средней кишке мухи цеце. Типичный вид — Т. (Nannomonas) congolense.

Подрод Trypanozoon (бывшие группы brucei и evansi) — полиморфные и мономорфные трипаносомы со свободным жгутиком или без него, с небольшим субтерминальным кинетопластом. Развиваются в средней кишке, слюнных железах и хоботке мухи цеце. Могут передаваться и механическим путем. Типичный вид — Т. (Trypanozoon) brucei.

Подрод Picnomonas (бывшая группа suis) — толстые мономорфные трипаносомы с коротким жгутиком и небольшим терминальным кинетопластом. Развиваются в средней кишке и слюнных железах мухи цеце. Типичный вид — Т. (Picnomonas) suis.

 

Методы гельминтолярвоскопии

Ларвоскопия (от лат. larva - личинка, греч. skopeo - смотрю) -совокупность приемов обработки и исследования проб материала с целью выявления личинок гельминтов и установления по ним возбудителя.

Гельминтоларвоскопию применяют для диагностики диктиокаулеза и протостронгилидозов жвачных, стронгилятозов. и стронгилоидоза у сельскохозяйственных животных.

1.1. Гельминтоларвоскопия при диктиокаулезе

В теплое время года быстро развиваются личинки стронгилят пищеварительного тракта, что затрудняет исследование материала. Поэтому пробы фекалий после взятия сразу следует направлять в лабораторию, чтобы исследовать до выхода из них личинок стронгилят.

Для дифференциации диктиокаулюсов предложена методика окраски. К осадку п пробирке или иа стекло добавляют 1-2 калли 0,1% водного раствора метиленового синего. Осадок встряхивают и через 20-30 с. микроскопируют. Личинки диктиокаулюсов овец окрашиваются в ярко-сиреневый, а личинки диктиокаулюсов телят в светло-сиреневый цвет. Личинки других нематод остаются неокрашенными, частицы корма окрашиваются в зеленый цвет, а жидкость - в голубой.

Личинки диктиокаулюсов овец располагаются в самых поверхностных слоях фекальных шариков. Поэтому разрушать их структуру при закладке проб не следует. Личинки протостронгилюсов, мюллерий, напротив, в шариках фекалий овец распределяются равномерно, на поверхности их находится незначительная часть. Поэтому при исследовании на указанные гельминтозы предварительно шарики фекалий следует разрушать. При этом эффективность исследований увеличивается в 10 раз.

1.2. Метод Вайда

Эта методика очень проста и применяется для диагностики диктиокаулезов жвачных, протостронгилеза, мюллериоза и цистокаулеза овец и коз.

На предметное или часовое стекло кладут несколько шариков свежевыделенных фекалий овец и коз и добавляют небольшое количество воды (температура около 40°С). Если шарики помещают на предметное стекло, то достаточно несколько капель воды. Через 40 мин. шарики удаляют, оставшуюся жидкость на стекле микроскопируют на наличие личинок нематод.

1.3. Метод Беумана-Орлова

Эта методика наиболее широко распространена и несложна по технике исполнения.. Для исследования по этому методу нужно иметь металлические или пластмассовые воронки (с верхним диаметром 10 см), маленькие гельминтологические пробирки (5-8 см высотой и 0,8-1 см диаметром), резиновые трубки (диаметром 0,7-0,8 см), штатив для воронок и зажимы.

Метод основан на следующем: личинки в теплой влажной среде активно выбираются из фекалий и, попав в воду, падают на дно.

Фекалии (5-10 г) кладут на металлическое сито или заворачивают в марлю и помещают в воронку. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10 см с зажимом, в свободный конец трубки вставляют пробирку. Собранный в таком виде аппарат Бермана ставят в штатив и заполняют теплой водой (40°С).

Аппарат с пробами от овец и коз оставляют при комнатной температуре на 3-6 часов, крупного рогатого скота и лошадей на 12 часов. За это время личинки нематод выползают из пробы в жидкость и опускаются до места перекрытия трубки зажимом. После истечения срока зажимы открывают и наполняют пробирки водой, в которой могут находиться личинки нематод. Пробирки ставят в штатив на 20 мин. для осаждения личинок. Затем воду из пробирок сливают до осадка. Осадок встряхивают на предметные стекла и микроскопируют. Личинки нематод подвижны и они легко обнаруживаются.

1.4. Метод Шильникова

Автор еще более упростил методику Бермана-Орлова. В этой методике используются обыкновенные медицинские градуированные стаканчики (емкостью 30 мл), имеющие форму усеченного конуса и сферическое дно. Выпуклость дна направлена кверху. Пробы фекалий завертывают в марлевые салфетки, раскладывают по стаканчикам и заливают теплой водой. Через 8-10 часов пробы осторожно вынимают, а жидкость отстаивают 10-15 мин Затем стаканчики медленно наклоняют, сливают воду до появления мути. Дают отстояться осадку жидкости 5-10 мин- После этого стаканчик медленно наклоняют и из него глазной пипеткой отсасывают верхний прозрачный слой воды до тех пор, пока в пипетку не начнет всасываться осадок на дне. При аккуратном отсасывании на дне стаканчика остается 0,5-1 мл жидкости. Этот осадок каплями наносят на предметное стекло и микроскопируют.

Эта методика заслуживает внимание практиков. Она проста и удобна для выполнения в любых условиях.

1.5. Культивирование личинок гельминтов

Его проводят с целью диагностики гельминтозов вообще и дифференциальной диагностики в частности. Культивирование заключается в создании для яиц гельминтов, находящихся в фекалиях, благоприятных условий, чтобы личинки выросли до инвазионной стадии. По их морфологии определяют вил возбудителей.

У домашних и диких травоядных в пищеварительном факте часто паразитируют нематоды из подотряда стронгилят. Выделяющиеся с фекалиями яйца этих нематод трудно различимы. Поэтому методами овоскопии практически ставят только общий диагноз. Дифференциальный диагноз возможен по развившимся личинкам

1.5.1. Метод культивирования личинок

Порцию свежих фекалий животного в количестве 10-30 г помещают в стакан, закрывают куском стекла и оставляют в. термостате при 25-27°С на семь дней или при комнатной температуре на 10-12 дней. По мере подсыхания пробу фекалий слегка увлажняют водой. По истечении указанных сроков пробу фекалий исследуют по методу Бермана-Орлова или Шильникова.

Освобожденный от фекалий стакан заполняют водой, выдерживают 15-20 мин., затем верхний слой осторожно сливают, а осадок исследуют в часовом стекле под микроскопом.