Рис. 18-1. Схема радиоавтографа

1 – эмульсия; 2 – срез; 3 – предметное стекло.

Светлые кружки – интактные зерна AgBr, темные кружки – зерна AgBr, образующие скрытое изображение в результате их ионизации электронами различной энергии (³H, ¹⁴C, ³²P); крестики – места локализации изотопов.

 

Интерпретация радиоавтографов

Интерпретация радиоавтографов дает информацию по следующим вопросам:

а) какой тип клеток метится;

б) какое соотношение между пометившимися и непометившимися клетками среди одного и того же типа клеток;

в) где локализуется метка;

г) какова интенсивность включившегося в клетку метчика (степень включения в единицу времени);

д) какие химические формы метятся в клетке.

 

Например. Костномозговые клетки человека были инкубированы с ³Н-тимидином при температуре +37˚С 3 часа, экспозиция 2 дня:

а) метка видна в ранних формах, т.е. в промиелоцитах, миелоцитах, базофильных нормобластах и ранних полихроматофильных нормобластах. Метамиелоциты, палочкоядерные нейтрофилы, поздние полихроматофильные нормобласты, плазмоциты и небольшие лимфоциты не метились;

б) пометилось около 50 % промиелоцитов, 35 % миелоцитов; 60 % базофильных нормобластов и 35 % ранних полихроматофильных номобластов;

в) метка всегда локализовалась в ядрах;

г) подсчет среднего количества зерен на меченую клетку: 60 зерен в промиелоцитах и базофильных нормобластах, 40 зерен в миелоцитах и ранних полихроматофильных нормобластах.

 

Работа 2.Подсчет процента меченых клеток костного мозга и интенсивность метки

Для подсчета процента меченых клеток необходимо взять препарат костного мозга и под микроскопом сосчитать 100 пометившихся и непометившихся ядросодержащих клеток. Во время просмотра мазка необходимо учитывать, что меченой считается клетка, содержащая не менее 3 гранул (зерен) серебра в ядре.

Интенсивность метки оценивают по количеству гранул серебра в ядре. При этом суммируют подсчитанные зерна во всех меченых клетках и вычисляют среднее их количество на клетку:

                                                  J = S / n,                                     

где J – интенсивность метки; S – сумма гранул; n – количество случаев.

Например. Из 100 клеток 10 клеток были мечеными и содержали гранулы в следующих количествах: 15+20+24+16+20+32+16+19+22+16=200 гранул

                                          200 гранул /10 = 20 гранул

В конце работы анализируют полученные результаты и заносят их в таблицу.

   

Вопросы для обсуждения:

1. Каковы особенности  радиоактивных изотопов, применяемых в авторадиографии?

2. Почему для приготовления радиоавтографов чаще всего используют β-излучатели?

3. Что может повлиять на качество радиоавтографов?

4. Какие физические процессы происходят в приготовленном автографе при экспозиции?

В чем достоинства и недостатки метода авторадиографии?

 

ЛИТЕРАТУРА

ОСНОВНАЯ:

1.  Акиев Р.М, Атаев А.Г., Багненко С.С. Лучевая диагностика: т.1 М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007.

2. Малаховский В.Н., Труфанов Г.Е., Рязанов В.В. Радиационная безопасность при радионуклидных исследованиях. Учебно-методическое пособие для врачей. – Санкт-Петербург: ЭЛБИ-СПБ, 2008

3. Козлов Ю.А., Новицкий В.В., Байков А.Н. Радионуклиды в медико-биологических исследованиях. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 1994.

4. Радионуклидная диагностика для практических врачей. Учебное пособие / Под ред. Ю.Б. Лишманова, В.Н. Чернова. – Томск: STT, 2004.

5. Терновой С.К., Синицын В.Е. Лучевая диагностика и терапия: учебное пособие ГЭОТАР-Медиа, 2009.

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ:

6. Кинетические аспекты гемопоэза / Под ред. Г.И. Козинца, Е.Д. Гольдберга. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 1982

7. Уразова О.И., Новицкий В.В. Лабораторная диагностика гематологических синдромов и болезней. Учебное пособие. – Томск: Изд-во Печатная мануфактура, 2008.

 

 

Занятие 19

Тема: ПРИМЕНЕНИЕ РАДИОНУКЛИДОВ В ЦИТОЛОГИИ И                    В ГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ

Цель:

1. Определить длительность митотического цикла клеток костного мозга с использованием метода авторадиографии.

2. Познакомиться с радионуклидными исследованиями в гематологии.

3. Освоить метод определения длительности жизни эритроцитов.

 

І. Самостоятельная работа во внеучебное время

Основные вопросы для самостоятельной подготовки и самоконтроля:

1. В чем особенности  клеточного цикла в активнообновляющихся и мало- обновляющихся тканях?

2. Какие радионуклидные методы исследования кинетики гемопоэтических клеток Вы знаете?

3. Что такое «тимидиновый индекс метки»?

4. Что характерно для основных приемов авторадиографического анализа клеточных циклов: «метода меченых митозов», «метода двойной метки»?

5. Как произвести построение кривой меченых митозов и расчет параметров клеточного цикла?

6. Каковы  особенности радионуклидных исследований в гематологии?

7. Чем характеризуется метод определения длительности жизни эритроцитов?

а) основные радиоактивные метчики;

б) требования к радиоактивным метчикам;

в) характеристика хрома-51 (⁵¹Cr);

г) изменение радиоактивности пробы со временем.

 

ІІ. Работа на занятии

План занятия:

1. Вводное слово преподавателя о цели и порядке выполнения практической работы – 15 мин.

2. Знакомство с методикой выполнения работы по изучению и расчету параметров клеточного цикла – 30 мин.

3. Решение задач – 25 мин.

4. Знакомство с методом изучения длительности жизни эритроцитов с помощью метки ⁵¹Cr – 20 мин.

5. Самостоятельная работа студентов – 45 мин.

 

Практическая работа студентов