Методы исследования системы свертывания крови (вторичного гемостаза)

Оценка первой фазы свертывания крови - образования протромбиназы.

1) Время свертывания крови по Ли-Уайту. Принцип метода. Отмечают время от момента внесения крови в пробирку до момента ее свертывания. Тест легко выполняется, но дает лишь ориентировочные результаты. Позволяет оценить внутренний механизм свертывания крови (при контакте со стеклянной поверхностью пробирки активируется XII фактор).

2) Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) (коалин-кефалиновое). Характеризует внутренний механизм свертывания крови. Для исследования используется цитратная венозная кровь. Принцип метода. Отмечается время образования фибринового сгуска после добавления каолина (для стандартизации контактной активации XII фактора) и кефалина (для стабилизации фосфолипидномембранной активации — эквивалент 3-го тромбоцитарного фактора) 19

 3) Определение количества отдельных факторов свертывания крови (VIII, IX, X и др.) в плазме крови больных (иммуноферментный анализ и др.).

Оценка второй фазы свертывания крови - образования тромбина.

Протромбиновое время (ПТВ). Позволяет оценить внешний механизм свертывания крови. Принцип метода. Отмечается время образования фибринового сгуска после добавления избытка тканевого тромбопластина, показатель отражает активность исследуемого протромбина.

Оценка третьей фазы свертывания крови — образования фибрина.

1) Определение концентрации фибриногена:

• гравиметрический (весовой) метод (по Р. А. Рутберг) — свертывание фибриногена плазмы хлоридом кальция, быстрое высушивание и взвешивание сгустка фибрина. Количество образующегося фибрина зависит от содержания фибриногена в плазме;

• хронометрический метод — отмечается время образования при добавлении избытка тромбина, данный показатель имеет линейную зависимость от содержания фибриногена.

2) Тромбиновое время. Принцип метода. Отмечается время образования фибринового сгустка после добавления тромбина. Удлиняется при дефиците или дефекте фибриногена, под влиянием антитромбиновой активности продуктов деградации фибриногена (ПДФ) или гепарина.

Методы определения фибринолитической активности

1) Определение спонтанной фибринолитической активности. Цельная кровь разводится цитратно-ацететным буфером, что ведет к значительному разбавлению ингибиторов фибринолиза и ускоренному лизису сгустка. После добавления тромбина отмечают время образования сгустка и время его полного растворения.

2) Определение активности плазмина плазмы. Плазмин отщепляет от нерастворимого азофибрина окрашенные пептиды, которые переходят в раствор. По концентрации растворимых окрашенных пептидов судят о фибринолитической активности.

 Методы определения растворимых комплексов мономеров фибрина (РКМФ) и продуктов деградации фибрина (ПДФ)

Данные методы имеют значение для диагностики ДВС-синдрома, массивных тромбозов.

1) Определение фибриногена В в плазме. Спиртовой раствор β-нафтола осаждает из плазмы фибрин-мономеры и их комплексы с фибринопептидами А и В и фибриногеном, появляющихся из фибриногена под действием тромбина, что проявляется появлением в пробирке нитей, гранул, сгустков.

 2) Этаноловый тест. Положительный результат теста (образование желеобразной массы (геля) после добавления этанола к исследуемой плазме) указывает на наличие комплексов фибрин-мономеров с продуктами деградации фибриногена и самим фибриногеном.

3) Протамин-сульфатный тест. Положительный результат теста (образование геля после добавления протаминсульфата к исследуемой плазме) указывает на наличие неполимеризующихся фибрино-мономерных комплексов.