Ход окрашивания

Буферный раствор

Окрашивание по Паппенгейму (модификация) Красители

Схема окрашивания мазков по методу Паппенгейма Состав фиксатора Мая-Грюнвальда

Схема окрашивания по методу Романовского-Гимзы

Состав красителя

Окрашивание по Гимзе

Используют специальный стандартный раствор Гимзы.

• Азур I - 3,772 г.

• Эозин - 2,165 г.

• Метиленовый синий - 1,563 г.

• Метанол (чистый) - 750,0 мл.

• Глицерин (чистый) - 256,0 мл. Ход окрашивания

1. Препарат давностью от 6 ч до 2-3 дней фиксируют в метаноле в течение 3 мин.

2. Опускают на 30 мин в красящую жидкость (5 мл стандартного раствора Гимзы и 20 мл дистиллированной воды с pH 6,8-7,2).

3. Споласкивают водопроводной водой, высушивают на воздухе.

Сухие мазки фиксируют в метиловом спирте или смеси Никифорова 5 и 15 мин соответственно. Затем погружают в рабочий раствор (в разведении 1:4) готовой краски Романовского-Гимзы на 5-7 мин. После этого промывают дистиллированной водой и высушивают.

• Порошок Мая-Грюнвальда - 250 мг.

• Метиловый спирт - 100 мл.

Раствор подогревают при 70 °С на водяной бане до полного растворения порошка, фильтруют и хранят в бутылке с притертой пробкой.

Перед окраской предварительной фиксации мазков не требуется. На подсохшие на воздухе мазки наливают краску - фиксатор Мая- Грюнвальда - на 3 мин. Не сливая краски, к ней добавляют такое же количество дистиллированной воды. Через минуту краску с мазка сливают и, не ополаскивая мазка, наливают рабочий раствор готовой краски Романовского-Гимзы (1 мл краски плюс 4 мл дистиллированной воды с pH 6,8) на 5 мин. Готовую краску Романовского-Гимзы перед приготовлением рабочего раствора фильтруют. После окраски препараты промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе, установив вертикально в специально изготовленной сушке.

1. Мая-Грювальда 0,3%.

300 мг порошка краски Май-Грювальда растворяют в 100 мл метилового спирта. Раствор созревает 3 дня.

2. Азур II.

1,0 г порошка растворяют в 1000 мл кипящей воды.

3. Эозин К или Na.

Для приготовления эозина К берут 1,0 г порошка и растворяют в 1000 мл кипящей воды. Для получения эозина Na берут 0,5 г порошка на то же количество воды.

1. Однозамещенный фосфорнокислый К или Na. 1,7 г соли на 100 мл дистиллированной воды.

2. Двузамещенный фосфорнокислый К или Na. 1,7 г соли на 100 мл дистиллированной воды.

Растворы можно хранить в холодильнике. Для получения воды с pH 6,8-7,2 необходимо смешать одну часть 1-го и две части 2-го раствора (10 мл 1-го раствора и 20 мл 2-го раствора на 1 л дистиллированной воды).

1. Фиксруют мазки (высушенные) в метаноле 3 мин.

2. Окрашивают в течение 10 мин в растворе состава: 1 часть красителя Мая-Грюнвальда 0,3% на 4 части дистиллированной воды (pH 6,8-7,2).

3. Докрашивают азур-эозином в течение 20 мин:

• раствор азура - 1 часть;

• раствор эозина - 1 часть;

• дистиллированная вода (pH 6,8-7,2) - 5 частей.

4. Смывают краску проточной водой.

5. Высушивают мазки на воздухе.