Ход реакции

Приготовление реактивов

Ход окраски

Пользуются готовыми наборами красителей и других реагентов, к которым прилагаются методики окрашивания, поэтому в учебнике мы приводим лишь некоторые их этих реакций.

В настоящее время при проведении цитохимических реакций часто

Специальные (цитохимические) методы окрашивания цитологических препаратов

Окрашивание на гемосидерин Реакция на берлинскую лазурь Реактивы:

2% раствор железосинеродистого калия (желтая кровяная соль): 1N раствор соляной кислоты; метиловый или солянокислый спирт.

Приготовление реактивов:

2% раствор железосинеродистого калия (желтая кровяная соль) Смешивают 2 г желтой кровяной соли и 100 мл дистиллированной воды.

Полученный раствор должен быть бесцветным.

1N соляная кислота - см. окрашивание на ДНК по Фельгену.

1. Обесцвечивают препарат метиловым или солянокислым спиртом.

2. Промывают дистиллированной водой.

3. Заливают 1N раствором соляной кислоты на 30 с.

4. Добавляют в кислоту равное количество раствора желтой кровяной соли. Перемешивают и красят препарат 10 мин.

5. Промывают дистиллированной водой.

6. Высушивают.

Значение реакции. Реакцию применяют для определения характера темных гранул в цитоплазме. Особенно важное значение реакция может иметь при необходимости отличить меланин от гемосидерина при подозрении на меланому. При наличии в клетках гемосидерина продукт реакции выявляют в виде сине-зеленых гранул (положительная реакция на берлинскую лазурь).

Окрашивание на ДНК по Фельгену Реактивы:

метиловый спирт; 1N соляная кислота; реактив Шиффа.

1. 1N соляная кислота (82,5 мл концентрированной соляной кислоты удельного веса 1,19 доливают дистиллированной водой до 1 л). Готовят в мерной колбе. Хранят в холодильнике.

2. Реактив Шиффа (см. «окрашивание на гликоген»).

3. Сернистая вода:

Смешивают 1,5 г сернокислого натрия (Na₂S₂O₅), 15 мл 1N соляной кислоты и 300 мл дистиллированной воды.

1. Препарат фиксируют в метаноле 15 мин.

2. Подогревают 1N соляную кислоту до 37°С.

3. В подогретый раствор 1N HC1 опускают стекло и ставят в термостат при 37°С на 20-25 мин.

4. Промывают стекло в отработанном растворе Шиффа из холодильника.

5. Помещают в чистый раствор Шиффа при 37°С на 45-60 мин.

6. Промывают сернистой водой 3 раза по 3 мин.

7. Промывают дистиллированной водой.

8. Погружают препарат в смесь ксилола и спирта (1:1).

9. Погружают препарат в ксилол.

10. Наносят каплю бальзама и покрывают покровным стеклом, избегая образования пузырей.

Значение реакции. Реакция на ДНК по Фельгену имеет особое значение в морфометрии, ее используют для определения плоидности ядер. Продукт реакции синего цвета, интенсивность окрашивания зависит от содержания ДНК в клетке.

Окрашивание муцикармином на слизь Реактивы:

сухой муцикармин; метиловый спирт; гематоксилин.