Простые и сложные методы окраски

Строение бактериальной клетки.

Основные обязательные структуры: оболочка, цитоплазма и ядерное вещество. Дополнительные – капсула, жгутики и др.

1. Оболочка бактерий плотная эластичная и состоит из трёх слоёв:

1) слизистый или капсула – для защиты;

2) клеточная стенка – для сохранения формы.

Прочность стенке придаёт полисахарид муреин. У одних бактерий он образует многослойный каркас с полимерами – тейхоевыми кислотами. Такие м/о при окраске по методу Грама удерживают комплекс генциан фиолета и йода и окрашиваются в сине-фиолетовый цвет – это грам «+».

Грам «-» имеют более тонкую клеточную стенку, включающую слой пептидогликана и липополисахаридов. Поэтому при сложной окраске они обесцвечиваются спиртом и прокрашиваются фуксином в розово-красный цвет.

При простом способе окрашивания на мазок наносится один краситель, при сложном методе окраски – два и более красителей. Перед окраской препарата мазок высушивают и фиксируют.

Окраска по Граму. Мазок зубного налёта.

I. Несколько капель генцианвиолета налить на препарат на 1-2 мин.

II. Слить излишки, не промывать. Нанести раствор Люголя до почернения на 1мин. Не промывать водой.

III. Капнуть 96° спирт до обесцвечивания препарата (30-60 сек.)

IV. Промыть водой.

V. Докрасить фуксином 2-3 мин., промыть водой, высушить.

3) цитоплазматическая мембрана (цпм) с функцией проницаемости и транспорта веществ. Она отделяется при плазмолизе в 1% растворе NaCl.

2. Цитоплазма – коллоидная смесь, содержит рибосомы (функция синтеза белка), различные органические соединения, гранулы (с запасом питат-х веществ), включения.

3. Ядерное вещество клетки – нуклеоид (генофор) в виде двунитчатой ДНК, замкнутой в кольцо. Функция хранения генетической информации.

Некоторые бактерии имеют органы движения (локомоторная функция).

Жгутики – тонкие нитевидные фибриллы, состоящие из сократимого белка-флагеллина, по длине превышающие саму клетку. Они характерны для палочковидных бактерий. Число и расположение жгутиков является видовым признаком.

Монотрихи – бактерии с одним жгутиком на конце. Например, холерный вибрион.

Амфитрихи – имеют по одному жгутику или пучку на обоих полюсах. Например, спириллы.

Лофотрихи – бактерии с пучком жгутиков на одном конце. Род псевдомонады – синегнойная палочка.

Перитрихи – жгутики расположены по всей поверхности тела. Род сальмонелла – брюшнотифозная пал-ка, кишечная.

Фимбрии и пили (ворсинки) – короткие и тонкие нити из белка – пилина покрывают тело клетки (у протея, сальмонелл, эшерихий). Бывают: общего типа (для прикрепления) и половые конъюгационые F-пили (для передачи наследственного материала).

2.3. Спорообразование – образование покоящейся формы при неблагоприятных условиях существования (высокая t°, высушивание, мало питат-х веществ) только у палочковидных бактерий. Одной клетке соответствует одна спора, поэтому функция защитная. Споры погибают только при t°>+120° и р=1,5-2 атм. – автоклавирование.

Расположение спор:

- центральное у сибиреязвенной бациллы;

- субтерминальное – ближе к концу клетки у возбудителя ботулизма, газовой гангрены;

- терминальное – на конце палочки у клостридий столбняка.

В благоприятных условиях споры прорастают, проходя 3 последовательных стадии: активация, инициация, прорастание.