УИРС. Исследование амилазной активности мочи

Исследование амилазной активности мочи по Вольгемуту производится аналогично методике приведенной выше для определения активности амилазы слюны). Амилазная активность мочи также отражает и величину клубочковой фильтрации. Снижение активности этого фермента в моче наблюдается при почечной недостаточности. В норме амилазная активность мочи по Вольгемуту составляет от 16 до 64 Е.

Для определения активности амилазы можно использовать также модификацию Бюхнера. По данному методу амилазная активность мочи выражается количеством фермента, расщепляющим 2 мг крахмала за 15 мин.

Ход работы. На сухую чашку Петри заранее капают в разных местах по 1 капле раствора Люголя (всего 8-10 капель). В пробирку вносят 2 мл 0,1% р-ра крахмала (2 мг крахмала), 1 мл физиологического р-ра и помещают пробирку на водяную баню при 37°С на 2 мин. Через 2 мин, не вынимая пробирку из бани, добавляют в нее 05 мл мочи, перемешивают и отмечают время начала реакции. Затем каждые 2-3 мин переносят каплю реакционной смеси на чашку Петри в раствор Люголя до тех пор, пока не произойдет полное разложение крахмала, т.е. до появления желтого цвета

Активность амилазы рассчитывают по формуле:

Х_ед=15/Т×0,5,

где х- активность амилазы в 1 мл мочи;

15 – время, необходимое для полного расщепления 2 мг крахмала;

0,5 – количество мочи, взятое на анализ, мл;

Т- время реакции, мин.

В норме активность амилазы мочи по Бюхнеру составляет 1-2 ЕД.

Эталоны ответов к тестовым заданиям

Вид 1. 1.1. – в; 2 –а.

Вид 2. 2.1. 1-В; 2-г; 3-а; 4-д; 5-б;

2.2. 1-а; 2-б; 3-в;

2.3. 1-е; 2- а, б; 3-г; 4-г; 5-д; 6-а, б, в.

Вид 3. 3.1.- 4; 3.2.- 1,2,3.

Вид 4. 4.1.- А (+, +, +); 4.2.- С (+, -, -).

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1. Молярная активность (число оборотов) – это количество молекул субстрата, превращаемое одной молекулой фермента за единицу времени. Молярная активность выражается в единицах Кат/г-моль фермента, либо Е/мкмоль фермента. Таким образом, молярная активность лактатдегидрогеназы составляет 9,6:0,002=4,8∙10³ мин^-1.

Задача 2. Катал – количество фермента, преобразующее моль субстрата в секунду (моль/сек). Активность фермента составляет 5 нКат, т.е. фермент преобразует 5•10 ^-9 моль субстрата в сек, следовательно, за 20 секунд - 5•20•10 ^-9 = 1•10 ^-7моль субстрата. Для перевода в граммы умножим эту величину на молярную массу субстрата (исходя из формулы ν=m/Mr):

1 •10 ^-7•672=672•10 ^-7грамм субстрата.

Задача 3. Для инфаркта миокарда характерно увеличение сывороточной активности ферментов аминотрансфераз – аспарагиновой и аланиновой), лактатдегидрогеназы (изофермент ЛДГ₁), креатинкиназы 2 (изофермент-МВ). Определение активности этих ферментов поможет в подтверждении диагноза.