Иммуномодуляторы - это природные или синтетические препараты, способные оказывать регулирующее действие на функции иммунной системы; кроме того, их влияние распространяется на другие системы организма: сосудистую, нервную, эндокринную, кроветворную.
Иммуномодуляторы синтезируются клетками организма (цитокины, гормоны, биологически активные пептиды), их также получают путем биосинтеза или химического синтеза и применяют в качестве лечебных и профилактических средств при различных заболеваниях и трансплантации.
Интерлейкины получают, используя в качестве продуцентов культуры нормальных лимфоцитов или макрофагов, культуры Т-клеточных гибридов и рекомбинантные клетки микроорганизмов. Т-клеточные гибридомы -это продукты слияния Т-лимфоцитов, продуцирующих определенный интерлейкин, и опухолевых клеток, способных к неограниченному росту. В качестве рекомбинантных продуцентов используют Е. coli, Saccharomyces cerevisiae и другие микроорганизмы, в геном которых методами генетической инженерии введены гены, контролирующие синтез интерлейкина (ИЛ-1, ИЛ-2).
|
|
Колониеспшмулирующие факторы (КСФ) - это разновидность цитокинов с преимущественным действием на гемпоэз, служат факторами выживаемости и роста кроветворных предшественников. Рекомбинантные препараты КСФ (лейкомакс, молграстим, лейкоген, ленограстим) используют для нормализации подавленного гемопоэза и активации иммунной системы, в частности, на фоне цитотоксической терапии опухолей и индуцированной иммунодепрессии при трансплантации.
Среди цитокинов ранее всего в медицинскую практику вошли препараты интерферона, которые используют при вирусных и некоторых злокачественных заболеваниях.
Интерфероны (ИФН) - это группа белков и гликопротеинов, каждый из которых синтезируется определенными клетками организма и выполняет специфические функции. Известно около 20 природных ИФН, различающихся по структуре и биологическим свойствам: α-ИФН состоит из 12 подвидов, β-ИФН - из 3-4 подвидов, γ-ИФН - из 2-3 подвидов. Рекомбинантные ИФН также имеют разновидности.
Продуцентом α -ИФН являются лейкоциты периферической крови человека, которые культивируют на специальной среде в присутствии вируса -интерфероногена. Нативный ИФН выделяют из культуральной жидкости осаждением и хроматографией. Метод имеет ограниченное применение из-за необходимости использования большего количества донорской крови.
β-ИФН синтезируется в культуре фибробластов (клеток соединительной ткани человека) в присутствии в качестве интерфероногена двухцепочечной РНК.
γ -ИФИ - в культуре иммунных Т- или В-лимфоцитов, в том и другом случае с низким выходом, поэтому производство с использованием культур клеток человека - процесс дорогостоящий. Экономически оправдано получение ИФН с использованием рекомбинантных культур микроорганизмов: Bacillus subtilis, Pseudomonas aeruginosa, Saccharomyces cerevisiae. Очистку ИФН проводят методом аффинной хроматографии с использованием моноклональных антител.
|
|
Технологическая схема получения генно-инженерных интерферонов (как одна из возможных) принципиально сводится к следующему:
1. индукция синтеза и выделение интерфероновой мРНК из клеток,
2. получение кДНК, комплементарной интерфероновой мРНК из
лейкоцитов,
3. встраивание кДНК в плазмиду,
4. введение реконструированной плазмиды в клетки Е. coli,
5. размножение бактерий, содержащих реконструированную плазмиду, в
культуральной среде,
6. сепарирование клеток Е. coli,
7. дезинтеграция и экстракция клеток Е. coli,
8. осаждение (например, полиэтиленамином) с последующим центрифуги-
ованием,
9. высаливание интерферона из супернатанта сульфатом аммония
10. диализ осадка интерферона,
11. растворение интерферона, пропускание раствора через колонку с имму-
носорбентом (пришитыми моноклональными антителами),
12. элюция интерферона с последующей хроматографией на целлюлозном
катионообменнике.