Аудиторная работа. Лабораторные работы (определение сахара в крови и моче цветной реакцией с o-толуидином)

Лабораторные работы (определение сахара в крови и моче цветной реакцией с o-толуидином).

1. Определение глюкозы в крови.

Принцип определения. Глюкоза при нагревании с о-толуидином в растворе уксусной кислоты вызывает зеленое окрашивание смеси, интенсивность которого пропорциональна содержанию сахара.

Ход работы. В центрифужную пробирку внести 0.9 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты, затем по стенке внести 0.1 мл крови, взятой микропипеткой из прокола опушки пальца. Смешать, центрифугировать.

К 0.5 мл центрифугата добавить 4.5 мл ортотолуидинового реактива, поместить пробирку на кипящую водяную баню точно на 8 мин и затем сразу же охладить проточной водой до комнатной температуры. В Конт­рольную пробу внести вместо крови столько же 0.14 н раствора NaCl и проделать те же операции. Если жидкость после нагревания мутна – отфильтровать.

Колориметрия проводится против контроля (красный фильтр, кю­вета - 10 мм).

Стандартные пробы выполняются также, как опытные с той разницей, что вместо крови вносят столько же раствора глюкозы (100 мг%). Расчет по формуле:

С_оп = (С _ст х Е _оп): Е _ст

где С_оп – концентрация глюкозы в исследуемой крови, мг%;

С _ст – в стандартной пробе, Е_оп и Е_ст - оптическая плотность опытной и стандартной проб соответственно.

2.Определение глюкозы в моче. 0.1 мл мочи смешать с 4.5 мл о-толу­и­ди­нового реактива, пробы обработать как при определении глюкозы (присутствие белка в моче определению не мешает).

Примечание: при высоком содержании глюкозы в моче или крови количество реактива может оказаться недостаточным для выявления всего продукта. В этом случае следует исследуемую жидкость разбавить в 2 раза, а результат увеличить соответственно (т.е. в 2 раза).