Лабораторная работа № 4

Морфология бактерий.

Теоретические пояснения:

По форме клетки бактерии делятся на три группы: шаровидные, палочковидные и извитые (рис. 4).

Рис. 4. Основные формы бактерий (по Асонову, 1997): Шаровидные: 1 – стафилококки, 2 – диплококки, 3 – стрептококки, 4 – тетракокки, 5 – сарцины. Палочковидные: 6 – бактерии, 7 – стрептобактерии, 8 – бациллы, 9 – стрептобациллы. Извитые: 10 – вибрионы, 11 – спириллы, 12 – спирохеты.

Шаровидные бактерии называются кокки (от лат. coccus – ягода) и имеют диаметр клетки от 0,5 до 1 мкм. Форма кокков разнообразна: сферическая, ланцетовидная, бобовидная. По взаимному расположению клеток после деления среди кокков выделяют: микрококки (от лат. micros – малый) – клетки делятся в разных плоскостях и располагаются поодиночке; диплококки (от лат. diplos -двойной) — клетки делятся в одной плоскости и затем располагаются попарно; к ним относятся ланцетовидные пневмококки и бобовидные гонококки и менингококки; стрептококки (от лат. streptos – цепочка) – клетки делятся в одной плоскости и не расходятся, образуя цепочку; стафилококки (от лат. staphyle – гроздь) – клетки делятся в различных плоскостях, образуя скопления в виде грозди винограда; тетракокки (от лат. tetra – четыре) – клетки целятся вдвух взаимно перпендикулярных плоскостях и располагаются по четыре; сарцины (от лат. sarcio – соединяю) – клетки делятся в трех взаимно перпендикулярных плоскостях и располагаются в виде тюков или пакетов по 8 или 16 клеток в каждом.

Кокки широко распространены во внешней среде, а также в организме человека и животных. Почти все группы кокков, исключая микрококки, тетракокки и сарцины, включают возбудителей инфекционных заболеваний.

Палочковидные формы называются бактериями. Средние размеры их от 1 до 6 мкм в длину и от 0,5 до 2 мкм в толщину.

Бактерии различаются по внешнему виду: концы их могут быть закругленными (кишечная палочка), обрубленными (возбудитель сибирской язвы), заостренными (возбудитель чумы) или утолщенными (возбудитель дифтерии). После деления бактерии могут располагаться попарно – диплобактерии (клебсиеллы), цепочкой (возбудитель сибирской язвы), иногда под углом друг к другу или крест-накрест (возбудитель дифтерии). Большинство бактерий располагается беспорядочно.

Среди бактерий встречаются изогнутые формы – вибрионы (возбудитель холеры).

К извитым формам относятся спириллы и спирохеты. Форма их клетки напоминает спираль. Большинство спирилл не болезнетворны.

Цель работы: изучить морфологию бактерий

Материалы и оборудование: Обезжиренные предметные стекла, культура микроорганизмов, стеклянная палочка, спиртовки, спички, бактериологические красители (синька Леффлера или раствор фуксина), стакан с водой, пинцет, полоски фильтровальной бумаги, пипетка для краски, микробиологические петли, микроскопы, иммерсионное масло.

Ход работы:

Для изучения морфологии бактерий следует приготовить настои из различных естественных материалов – мяса, рыбы, белка яйца, навоза, сена, муки, овощей, фруктов и др. Небольшое количество материала измельчают, помещают в склянку, на кончике скальпеля добавляют немного мела и заливают водопроводной водой на ²/₃ объема склянки. Склянку с настоем выдерживают в термостате при 25–28°С или в теплом помещении в темноте 3–5 дней. За это время в среде накапливается масса разнообразных бактерий.

Из жидкости настоя готовят параллельно два препарата: один – прижизненный (раздавленная капля), второй – постоянный (мазок). Прижизненный препарат микроскопируют, рассматривают, пользуясь объективом ВИ-40; мазок рассматривают при объективе МИ-90. Просматривая препараты, делают зарисовки микроорганизмов, обращая внимание на форму, взаимное расположение клеток и на соотношение размеров бактерий при разном увеличении микроскопа.

Для изучения характера движения бактерий прижизненный препарат желательно микроскопировать в темном поле микроскопа.

Большое впечатление о морфологическом разнообразии бактерий на начинающего микробиолога производит негативный тушевой препарат, приготовленный из материала любого настоя. Препарат микроскопируют, пользуясь объективом МИ-90. В поле зрения микроскопа на общем темном фоне туши отчетливо видны неокрашенные клетки микроорганизмов различной формы, разных размеров, расположенные в разнообразных сочетаниях. Можно использовать колонии микроорганизмов, высеянные из воздуха на пластинке МПА в чашке Петри. Из воздуха, как правило, выделяют представителей родов Micrococcus, Sarcina, Bacterium, Bacillus. Для наблюдения стрептококков готовят мазки из кисломолочных продуктов. С вибрионами и спириллами можно познакомиться на мазках, приготовленных из настоя навоза или из стоячей воды.

а б

Рис.5. Микрофлора: а) навозного настоя б) зубного налёта

Для ознакомления со спирохетами готовят мазки из зубного налета в капле воды. Особенно удачные препараты получают из налета на кариесных зубах. Мазки из зубного налёта необходимо проводить с соблюдением правил асептики и антисептики. Работу проводить в резиновых перчатках, одноразовыми стерильными инструментами. После работы отработанный материал и инструментарий погрузить в дезраствор на 1 час. На препаратах среди прочих бактерий легко выделяются большая и малая зубные спирохеты Spirochaeta macrodenta и Spirochaeta microdenta (рис. 5).

Задания:

1. Рассмотреть постоянные препараты микроорганизмов различной

формы (Streptococcus, Staphylococcus, Sarcina, Bacillus, Pseudomonas), поль-зуясь объективом МИ-90. Зарисовать.

2. Приготовить прижизненный препарат из зубного налета в капле воды. Промикроскопировать с объективом МИ-90.

3. Приготовить прижизненный и фиксированный препараты из настоя

какого-либо естественного субстрата (мяса, рыбы, сена, овощей, фруктов).

Прижизненный препарат промикроскопировать, пользуясь объективом ВИ-40; мазок – с объективом МИ-90.

4. Просматривая препараты, сделать зарисовки микроорганизмов, обращая внимание на форму, подвижность, взаимное расположение клеток и

на соотношение размеров бактерий.

Вопросы для самоконтроля:

1. Какие формы имеют микроорганизмы?

2. Какая структура клетки поддерживает форму бактерий?

3. Какие микроорганизмы называют «сарцины»?

4. Какие микроорганизмы называют бациллами?

5. Чем отличаются спириллы от спирохет?