Для разделения белков сыворотки крови на их составляющие используют метод электрофореза, основанный на различной подвижности белков сыворотки крови в электрическом поле.
Принцип разделения белков сыворотки крови на фракции состоит в том, что в электрическом поле белки сыворотки крови движутся по смоченной буферным раствором хроматографической бумаге (ацетатцеллюлозной пленке, крахмаловому, агаровом гелям) со скоростью, зависящей в основном от величины электрического заряда и молекулярной массы частиц.
Вследствие этого белки сыворотки крови разделяются обычно на пять основных фракций: альбумины, альфа-1-глобулины, альфа-2-глобулины, бета-глобулины, гамма-глобулины, содержание которых определяется с помощью фотометрии или денситометрии.
Электрофорез в агаровом, крахмальном и особенно полиакриламидном геле дает лучшие результаты: четкое разделение и большое количество белковых фракций сыворотки. Недостатки метода: сложность процедуры приготовления геля (дороговизна готовых гелевых пластин).
|
|
Преимущества электрофореза на ацетатцеллюлозной пленке:
1. Химическая однородность пленки и одинаковый размер пор
2. Требует малый объем пробы (0,2-2 мкл) для разделения
3. Быстрота разделения и окраски белков, легкость отмывания фона
4. Низкая стоимость
В сыворотке крови здорового человека при электрофорезе можно обнаружить шесть белковых фракций: преальбумины, альбумины, альфа-1-глобулины, альфа-2-глобулины, бета-глобулины и гамма-глобулины.
Это исследование в диагностическом отношении более информативно чем определение только общего белка или альбумина. При многих заболеваниях изменяется процентное соотношение белковых фракций, хотя общее содержание белка в сыворотке крови остается в пределах нормы.
Анализ фореграммы белков позволяет установить, за счет какой фракции происходит увеличение или дефицит белка, а также судить о специфичности изменений, характерных для данной патологии. Исследование белковых фракций, позволяет судить о характерном для какого-либо заболевания избытке или дефиците белка только в самой общей форме.
Белковые фракции сыворотки крови в норме:
Фракции | Содержание, % |
Преальбумины | 2-7 |
Альбумины | 52-65 |
Альфа-1-глобулины | 2,5-5,0 |
Альфа-2-глобулины | 7,0-13,0 |
Бета-глобулины | 8,0-14,0 |
Гамма-глобулины | 12,0-22,0 |
При анализе результатов исследования сыворотки крови на белковые фракции выявляются три типа нарушений:
1. Диспротеинемия (изменение соотношения белковых фракций)
2. Генетические дефекты синтеза белков
3. Парапротеинемия (аномальные белки в крови)