Оценка защитного действия биоцидных веществ методом «агаровой сетки» и «агаровых блоков»

Метод «агаровой сетки» был разработан» с целью оптимизации и стандартизации условий роста микроскопических мицелиальных грибов на поверхности бетона, древесины,бумаги, лакокрасочных покрытий, других природных и синтетических материалов с фунгицидными добавками. Сущность метода заключается в том, что на поверхность испытуемых образцов, помещенных в чашки Петри, наносят небольшое количество стандартной агаризованной питательной среды (среда Чапека, Чапека-Докса и др.), которая при застывании была тщательно перемешана и смешана со спорами тест-культуры гриба.

При реализации данного метода инокулированную среду равномерно распределяют по поверхности образца в присутствии сетчатого шаблона. В качестве исследуемого образца был выбран пленкообразователь, в который вносили расчетное количество биоцида. Критерием фунгитоксичности служила лаг-фаза тест-культуры Aspergillus niger), т. е. время от посева до на­чала активного роста гриба. Данный параметр хорошо коррелирует с концентрацией биоцидных препаратов в лакокрасочных покрытиях.

После снятия шаблона на образце остается так называемая «агаровая сетка», представляющая собой разделенный на миниатюрные блоки сетью борозд слой агаризованной среды, высота которого равна толщине сетчатого шаблона. Чтобы избежать высыхания среды образцы помещают на увлажненные бумажные фильтры или слой агарового геля («голодный агар»).

Через определенные промежутки времени, не реже чем 1 раз в сутки, несколько ячеек агаровой сетки снимают с образцов, помещают на предметные стекла в каплю воды и микроскопируют в проходящем свете [18].

Метод агаровых блоков чаще всего применяется при изучении антагонистических свойств микроорганизмов. Его преимуществом является возможность культивирования микроорганизмов-антагонистов и тест-культур на разных по составу плотных питательных средах.

При проведении анализа исследуемые на антагонистическую активность мицелиальные грибы засевают на поверхность агаризованной среды в чашке Петри так, чтобы в процессе роста сформировался сплошной газон. Для этого бактериологической петлей переносят споры грибов в 1 мл стерильной воды. 0,1–0,2 мл полученной суспензии распределяют шпателем по всей поверхности среды. Инкубируют посевы при температуре 20 ⁰С 8–10 суток.

Затем стерильным пробочным сверлом (диаметр 6–8 мм) из слоя среды вырезают агаровые блоки и переносят их на поверхность агаризованной среды с испытуемым материалом. Агаровые блоки размещают ростом (газоном) вверх. Схема проведения испытания по экспресс – методу оценки грибостойкости материалов приведена на рисунке 6.

Водный агар в чашке Петри

а

Агаровый блок с мицелием

Зона обрастания блока мицелием

Рисунок 6 – Схема проведения испытания по экспресс – методу оценки грибостойкости материалов (покрытий)

Посевы инкубируют в оптимальных для развития используемого микромицета условиях в течение 14 суток. После этого учитывают ширину зоны обрастания агарового блока мицелием и стадию развития гриба [19].