Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции

Возбудителями ВИЧ (В ирус И ммунодефицита Ч еловека)-инфекции или СПИДа (С индром П риобретенного И ммуно Д ефицита – обычно так обозначается терминальная стадия ВИЧ-инфекции) являются РНК-геномные ви­рус иммунодефицита человека (ВИЧ-1, ВИЧ-2, английская аб­бревиатура — HIV), входящие в семейство Retroviridae, подсемейство Lentivirinae.

Материалом для исследования с целью выделения вируса является кровь (Т-лимфоциты), биоптаты костного мозга (лейкоциты), пунктаты лимфатических узлов, спер­ма, спинномозговая жидкость, секционный материал, реже слюна.

Лабораторная диагностика ВИЧ-инфекции основана, прежде всего, на выявлении антител к ВИЧ в крови больных и ВИЧ-инфи­цированных, в последнее время – на методах генодиагностики, реже (в основном, в исследовательских целях) проводится вирусологическое исследование с целью выделения ВИЧ.

Вирусологический метод имеет серьезные ограничения, связанныес применением специальных культур лимфоцитов, требующих особых трудоемких условий культивирования. ВИЧ в культуре лимфоцитов вызывает образование симпластов с последующей гибелью лимфоцитов. Идентификацию вируса проводят с помощью РИФ, электрон­ной микроскопии и определения активности типичного для ретровирусов фермента - РНК-зависимой-ДНК-полимеразы (обратной транскриптазы).

Серологический метод наиболее распространендля лабораторной диагностике ВИЧ-инфекции.Чаще всегоиспользуют ИФА, реже - РИА, РИФ.

Подтверждающим высокоспецифичным методом серологической диагностики ВИЧ-инфекции явля­ется метод иммуноблотинга. Реакция выполняется в несколько этапов. Сначала прово­дится электрофоретическое разделение белков ВИЧ с после­дующим перенесением их на нитроцеллюлозную мембрану. Затем мембрана обрабатывается исследуемой сывороткой крови, после чего на нее наносят антивидовые меченые ферментом или радиоактивным изотопом сыворотки с целью выявления антител к различ­ным белкам ВИЧ с помощью ИФА или РИА. Результаты иммуноблотинга считают положительными при обнаружении анти­тел к антигенам ВИЧ p24, p31, gp41, gp120.

Генодиагностика. Разработана качественная ПЦР для определения ДНК провируса с целью диагностики ВИЧ-инфекции, а также количественная ПЦР для выявления РНК вируса в крови как прогностический тест подтвержденной ВИЧ-инфекции.