М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

7 8 9 10 11 12 13

Окраска по Леффлеру

1. Приготовить равномерный фиксированный мазок.

2. Окрасить мазок метиленовым синим Леффлера, красить 3-5 мин.

3. Слить краситель и промывать препарат водой.

4. Высушить препарат на воздухе.

З а д а н и е №4

Изучить подвижность бактерий в препарате «раздавленная капля» из суспензии маслянокислых бактерий. Микроскопировать препарат с объективами 8´ и 40´, при вогнутом зеркале и опущенном конденсоре. При исследовании живых микробов следует отличать характер подвижности бактерий – активный от пассивного (броуновского движения). Препарат зарисовать.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Прижизненный препарат «раздавленная капля»

1. Приготовить чистое и обезжиренное предметное стекло.

2. Взять стерильной пипеткой каплю суспензии микроорганизмов.

3. Нанести каплю в центр предметного стекла.

4. Опустить ребром на край капли покровное стекло под углом 45° (поместить на каплю так, чтобы в ней не образовывались пузырьки воздуха).

Внимание: каплю нужно брать такой величины, чтобы она заполняла все пространство между покровным и предметным стеклами и не выступала за края покровного стекла. Если жидкость будет нанесена в избытке, ее необходимо удалить при помощи полосок фильтровальной бумаги.

Занятие №4

Питание, дыхание и размножение микроорганизмов

Бактериологический метод диагностики

Вопросы для подготовки

1. Питательные субстраты бактерий. Типы питания прокариот – автотрофы, гетеротрофы, прототрофы, ауксотрофы и т.д.

2. Механизмы транспорта питательных веществ в клетку – пассивная диффузия, облегченная диффузия и активный транспорт.

3. Механизмы транспорта веществ из бактериальной клетки. Системы секреции прокариот, строение и функции. Примеры.

4. Питательные среды, их классификация, состав и назначение. Примеры.

5. Принципы культивирования микроорганизмов в условиях лаборатории (температура, влажность, аэрация, окислительно-восстановительный потенциал, рН среды, освещенность). Факторы роста, их химическая природа.

6. Кривая роста бактериальной популяции на жидкой питательной среде, ее подробный анализ. Система проточного культивирования бактерий, ее использование в промышленной микробиологии.

7. Пигменты микроорганизмов. Классификация по химическому составу и растворимости. Биологический смысл пигментообразования.

8. Методы выделения чистых культур бактерий. Определение понятий: «чистая культура», «накопительная культура», «биовар», «штамм», «колония».

9. Бактериологический метод диагностики (I и II этапы/дни исследования). Цель и задачи. Морфолого-культуральные свойства бактерий.

10. Заполнить таблицу «Некоторые приемы выделения чистых культур микроорганизмов»:

Метод	Принцип метода	Область применения
Посев по Коху (серийные разведения)
Посев методом «истощения»
Посев по Дригальскому
Посев на элективные среды
Посев газоном
Обработка исследуемого материала кислотой или щелочью
Прогревание исследуемого материала при 80°С
Фильтрация исследуемого материала через мембранные фильтры
Посев по Шукевичу

Практическая работа

З а д а н и е №1

Классифицировать предложенные питательные среды, наиболее часто используемые в медицинской микробиологии. Результаты представить в виде таблицы.

Питательная среда	Происхождение	Консистенция	Назначение	Состав**
Естественная	Искусственная	Жидкая	Полужидкая	Плотная	Общая	ДДС*	Элективная*

*указать дифференцирующий/элективный фактор

**указать для одной питательной среды назначение каждого компонента

З а д а н и е №2

Описать культуральные свойства чистых культур бактерий на жидких питательных средах и скошенном мясо-пептонном агаре. Результаты оформить в виде рисунка с комментариями.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

При описании роста микроорганизмов на жидких питательных средах отмечают: помутнение среды, образованием пленки, нитей или осадка. Отмечают степень помутнения – слабая, умеренная; особенности пленки – слабая, окрашенная, хрупкая, тонкая; свойства осадка – слизистый, хлопьевидный, рыхлый и др.

При описании роста микроорганизмов по штриху отмечают следующие особенности: скудный, умеренный, обильный, диффузный или четковидный рост. Характеризуют оптические свойства налета, его цвет, поверхность и консистенцию.

З а д а н и е №3

Описать культуральные свойства бактерий на плотных питательных средах. Результаты оформить в виде таблицы.

Изучаемые колонии	Питательная среда

Форма
Размер
Цвет
Характер края
Консистенция
Примечание
Рисунок

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Форма колонии – округлая, неправильная, ризоидная и т.д.

Размер (диаметр) колонии измеряют в мм; если размер колонии не превышает 1 мм, то их называют точечными.

Цвет колонии – бесцветная (грязно-белые колонии относят к бесцветным) или пигментированная – белая, желтая, золотистая, оранжевая, сиреневая, красная, черная. Особо отмечают выделение пигмента в субстрат. При описании колоний грибов отмечают пигментацию воздушного мицелия.

Поверхность колонии – гладкая, шероховатая, бороздчатая, складчатая, морщинистая, с концентрическими кольцами или радиально исчерченная.

Характер края – ровный, волнистый, зубчатый, бахромчатый и т.д. Край и структуру колонии определяют с помощью лупы или при малом увеличении микроскопа.

Консистенцию колонии определяют, прикасаясь к ее поверхности петлей. Колония может легко сниматься с агара, быть плотной, мягкой или врастающей в агар, слизистой (прилипает к петле), тягучей, пленчатой (снимается целиком), хрупкой (легко ломается при прикосновении петлей).

З а д а н и е №4

Изучить культуральные свойства плесневых грибов и дрожжей на плотных и жидких питательных средах. При описании культуральных свойств плесневых грибков отмечают характер мицелия (субстратный или воздушный), наличие или отсутствие пигмента. Результаты оформить в виде таблицы*.

Изучаемые свойства	Питательная среда

Форма колонии
Размер колонии
Цвет колоний
Характер края
Консистенция
Примечание
Рисунок