М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я. В пробирки с 1 мл МПБ добавляют исследуемый антибиотик в различных концентрациях: от 1 до 128 ед/мл

В пробирки с 1 мл МПБ добавляют исследуемый антибиотик в различных концентрациях: от 1 до 128 ед/мл. Все пробирки засевают 1 мл бульонной культуры стафилококка. Посевы инкубируют в термостате при 37° в течение 24 ч. Учитывают результаты определения МПК.

МПК – это наименьшая концентрация антибиотика, при которой не происходит размножение бактерий и содержимое пробирки остается прозрачным.

Для определения МБК из пробирок с отсутствием видимого роста и из пробирки с минимальной концентрацией антибиотика, где есть рост (контроль) делают высев секторами в чашки Петри с МПА. На секторах обозначают концентрацию антибиотика, из которой сделан высев. Посевы ставят в термостат при 37°С на 18-24 ч. Учитывают результаты определения МБК по отсутствию роста бактерий на агаре в соответствующих секторах.

З а д а н и е №6

У двух госпитализированных членов семьи по клиническим признакам и данным анамнеза врач заподозрил холеру. Взятый у больных исследуемый материал (испражнения) направлен в лабораторию ООИ областного ЦГСЭН. Для экспресс-анализа чувствительности возбудителя к антибиотикам был использован метод Роджерса. Используя готовые демонстрации учесть результаты, оформить протокол. Сделать вывод.

Ответить на вопросы:

1. Какие достоинства и недостатки имеет экспресс-метод Роджерса?

2. С какой целью и как поставлены контроли?

«+» – синее окрашивание в лунке (микроб чувствителен к антибиотику)

«–» – отсутствие окрашивания (микроб резистентен к антибиотику)

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

Метод Роджерса основан на качественной реакции на нитрит-ионы. Патологический материал от больного, содержащий возбудителя, выдерживается 1-2 ч в МПБ с добавлением нитрата калия (0,1%), затем бульон разливается в лунки планшета, в каждую из которых кладут диски с антибиотиками. При росте микробов образуется нитратредуктаза, которая восстанавливает нитрат-ион в нитрит-ион. В лунки последовательно добавляют 5%-ный раствор иодида калия, 5%-ный раствор серной кислоты и 1%-ный раствор крахмала по 0,1 мл каждого компонента. При этом нитраты в присутствии серной кислоты выделяют из иодида калия иод, который, взаимодействуя с крахмалом, дает синее окрашивание:

2КNO₃ + 2KI + 2H₂SO₄ → I₂ + 2K₂SO₄ + 2NO₂ + 2H₂O,

крахмал + I₂ → крахмал-I₂ (синее окрашивание).