Терапевтическое введение компонентов крови

Введение компонентов крови часто необходимо как дополнительное лечение щенков и котят. Обычно используется цельная кровь, эритроцитарная масса и плазма. Показаниями для использования свежей цельной крови являются геморрагический шок, анемия, сильное травматическое кровотечение, патология крови (тромбоцитопения или плохая свертываемость крови) и неиммунная гемолитическая анемия. Исключая кровотечения, во всех остальных случаях правильно сохраненная цельная кровь может быть заменой свежей цельной крови. Обычное лечение большинства анемий у котят и щенков также может быть дополнено переливанием эритроцитарной массы. Плазма в основном используется для улучшения свертываемости крови и при сильном дефиците белка.

Сбор цельной крови

Самым безопасным и доступным местом для забора цельной крови является яремная вена. Количество крови, которое может быть безопасно собрано через яремную вену от донора собаки или кошки, составляет свыше 22 мл/кг веса тела каждые 2 недели. Доноры могут находиться под действием седативных препаратов, а место сбора хирургически подготовлено. Контейнер для крови должен быть расположен выше пластикового аппарата по переливанию крови и может быть перемещен только после введения иглы в вену. Игла должна быть чистой, чтобы обеспечивать хороший кровяной поток и минимизировать активацию тромбоцитов, свертываемость и загрязнение тканей. Когда полный объем крови собран, трубка отсоединяется перед извлечением иглы из вены. Прямое давление должно прикладываться к месту сбора еще в течение 5—10 минут для гемостаза.

Кровь лучше всего собирать в пластиковые мешки с растворами цитрата-фосфата аденина (ЦФА) или ацид-цитрата глюкозы (АЦГ). Отношение объема антикоагулянтов (ЦФА и АЦГ) к объему крови составляет 1:7 для сохранения всех компонентов (в ЦФА собачья и кошачья кровь сохраняются 28 дней при температуре 28° С, а в АЦГ — 21 день при той же температуре). Если кровь переливается непосредственно после сбора, то добавляются разбавленные 1:10 антикоагулянты. Если используется гепарин, то 625 единиц гепарина добавляют на каждые 50 мл собранной крови. Для удобства последующих процедур кровь собирают в пластиковые мешки в количестве 450 мл ЦФА или АЦГ-антикоагулянта, с обязательным перемешиванием. Для контроля за количеством собираемой крови используются тройчатые равновесные или десятичные электронные весы. 1 мл крови весит примерно 1 г, поэтому 450 мл крови весят примерно 450 г плюс вес мешка и антикоагулянтов. После сбора соединительная трубка убирается, а содержимое мешка перемешивается. Затем собранная кровь используется сразу или хранится при соответствующей температуре для последующего применения.

Если сразу необходимо небольшое количество собранной крови, то в пластиковый шприц объемом 50 мл набирается 7 мл антикоагулянта, а остальной объем заполняется кровью. Кровь из любого открытого резервуара, будь то шприц или пластиковый мешок с уже введенной иглой, должна использоваться в течение 24 часов.

Сбор эритроцитов и плазмы

Сбор эритроцитов требует системы из двух или трех мешков, когда один из них служит для сбора цельной крови, а два других являются дополнительными для эритроцитов. Это позволяет держать собранную кровь закрытой во время сепарации. После сбора цельной крови эритроциты и плазма должны быть отделены от нее. Кровь, собранная в пластиковый мешок с антикоагулянтами, в охладителе, наполненном льдом, отправляется на местное предприятие для переработки. Кровь не должна соприкасаться со льдом. На предприятии по переработке крови мешки с кровью и антикоагулянтами помещаются в центрифугу при температуре 4° С и сепарируются со скоростью 5000 оборотов в минуту в течении 10 минут. Отделенная плазма помещается в дополнительный мешок, а оставшиеся эритроциты маркируются и хранятся 21 день.

Свежезамороженной является плазма, охлажденная в течении 8 часов после сбора крови, она используется в основном для поддержания свертываемости крови (при гемофилии А, болезни Виллибранда, отравлении родентицидом, синдроме диссеминированной внутрисосудистой свертываемости). Она должна быть заморожена и храниться при температуре -70°С для оптимального сохранения фактора свертываемости в течении 1 года или в конвенционном холодильнике 3 месяца. После 1 года хранения плазма не используется для поддержания фактора свертываемости, хотя может применяться для лечения гемофилии В (требуется фактор IX) или отравления родентицидом (требуются факторы II, VII, IX и X), или может храниться еще 5 лет при той же температуре.

Группы крови

Группа крови у собак не играет большой роли при переливании крови от животного с той же группой, но может встречаться несовместимость антигенов плазмы. Группа крови помогает минимизировать угрожающую жизни реакцию при переливании не подходящей крови (табл. 4.6 и 4.7). Это особенно важно для кошек, которые в отличии от собак имеют естественные антитела против крови других групп. У животных-доноров необходимо определять группу крови. Знание группы крови также может быть важно для животных, предназначенных для разведения, чтобы предотвратить изоэритролиз (особенно важно для кошек).

Таблица 4.6 Группы крови у собак

Группа крови СЭА*	Популяционный охват	Присутствие естественных антител	Реакция при переливании несовместимой крови
1.1		Нет	Нет реакции при первом переливании. Острая реакция из-за несовместимости при последующем переливании
1.2		Нет	Нет реакции при первом переливании. Острая реакция из-за несовместимости при следующем переливании
		Да	Замедленная реакция при первом перливании. Ускоренное замещение эритроцитов, отсутствие гемолиза
		Нет	Нет реакции при первом переливании
		Да	Замедленная реакция при первом переливании. Ускоренное замещение эритроцитов, отсутствие гемолиза
	98-99	Нет	Нет сведений
		Да	Замедленная реакция при первом переливании. Ускоренное замещение эритроцитов, отсутствие гемолиза
		Нет	Нет сведений

* Собачий эритроцитарныи антиген

Аллоантитела проходят через молозиво в первые 16 часов после рождения котят, и все котята с группой В (в меньшей степени с группой А) имеют эти антитела уже в возрасте нескольких недель. Таким образом, кошки не нуждаются в повышении чувствительности ни при первом переливании крови, ни в период беременности, чтобы развить аллоантитела, и отрицательная реакция может быть при первом переливании или у котят первого помета данной кошки. Возможно рождение котят с группой А от кошки с группой В и кота с группой А. У собак, от суки с эритроцитарным антигеном (СЭА) 1.1 отрицательным и кобеля с СЭА 1.1 положительным могут родиться щенки с СЭА 1.1 положительным. Если такое происходит или суке переливали эритроциты и она чувствительна к СЭА 1.1, антитела к СЭА 1.1 проходят через молозиво. Щенки, нормальные при рождении, могут давать иммунно-промежуточную гемолитическую анемию в возрасте 3—10 дней.

Таблица 4.7 Группы крови у кошек (noGriot-Wenk and Giger, 1995)

Группа	Комментарий крови
А	Наиболее распространенная. Имеет высокие титры анти-В. Встречается у 95—99,7% домашних коротко и длинношерстных кошек в США, 74% в Австралии, 85—100% в Англии и Европе. Все сиамские кошки и производные от них породы (бирманская, тонкинская, русская голубая) имеют эту группу крови
В	Не так распространена, но и не редка. Имеет высокие титры анти-А. Частота варьируется у отдельных пород, 1—10% у мэйн куна и норвежской лесной, 11—20% — у абиссинской, бирманской, персидской, сомалийской, сфинкса, шотландской вислоухой, 20—45% — у экзотической и британской короткошерстной, корниш-рекс и девон-рекс
АВ	Встречается редко. Нет антител на группы А и В. Встречается у домашних короткошерстных, абиссинской, бирманской, английской короткошерстной, норвежской лесной, персидской, шотландской вислоухой и сомалийской пород

Перекрестные пробы, на совместимость

Дополнительно при определении группы крови у домашних собак и кошек могут выполняться, если возможно, перекрестные пробы на совместимость. Невосприимчивость, выявленная перекрестными пробами, показывает раннюю чувствительность реципиента (у собак) или естественное появление изоантител (особенно важно для кошек). Щенкам и котятам, нуждающимся в повторном переливании крови, необходимо давать кровь от доноров, с которыми у них есть перекрестная совместимость.

Перекрестные пробы выполняют для определения мажорной и минорной совместимости. При тесте на мажорную совместимость главное взаимодействие происходит между донорскими клетками и сывороткой реципиента, когда определяется, имеет ли реципиент антитела на донорские клетки. При тесте на минорную совместимость исследуют взаимодействие клеток реципиента и сыворотки донора, выделяя антитела в донорской сыворотке против клеток реципиента, что имеет меньшее значение. Оба теста проводятся на свежей крови, потому что анти-СЭА антитела фиксируются дополнительно. Переливание крови производится при главной совместимости.

Образцы крови по 5 мл берутся у донора и реципиента, крови позволяют свернуться. После центрифугирования сыворотка помещается в отдельные пробирки, а кровяной сгусток осторожно разбивается и 0,3 мл клеток отделяется от каждого образца и помещается в пробирки, в каждой из которой содержится по 9,7 мл обычного соляного раствора. Клетки должны быть смочены соляным раствором, чтобы удалить плазму и предотвратить образование фибриновых сгустков. После смачивания всплывшую массу удаляют, а оставшиеся клетки помещают в раствор — 0,3 мл клеток на 9,7 мл соляного раствора. Мажорная совместимость проявляется при добавлении 0,1 мл сыворотки реципиента к 0,1 мл суспензии с донорскими клетками, минорная совместимость — при добавлении 0,1 мл донорской сыворотки к 0,1 мл клеток реципиента. Контрольная реакция производится между сывороткой реципиента и смоченными клетками. Каждый тест проводится три раза и выдерживается (инкубируется) по 15 минут: один набор при температуре 37°С, другой при комнатной температуре и третий при температуре 4°С. Инкубация при различных температурах необходима, потому что реакция несовместимости может произойти при разных температурах.

После инкубации каждая пробирка центрифугируется в течение 1 минуты при скорости 280 об/минуту, и всплывшие массы проверяются на гемолиз. Пробирки осторожно встряхиваются, чтобы проверить агглютинацию эритроцитов. Кровь совместимых групп не показывает ни агглютинации, ни гемолиза. Если агглютинация не отмечена, то небольшое количество материала кладется на чистое смотровое стекло для проведения микроскопического анализа. Любая степень агглютинации или гемолиза при мажорной совместимости является показателем несовместимости, и переливание не производится. Если небольшая агглютинация или гемолиз проявляется при минорной совместимости, то переливание возможно в критическом случае.

Назначение компонентов крови

Перед применением сохраняемые компоненты крови должны быть подогреть! до комнатной температуры, чтобы не вызвать гипотермию у реципиента. Для подогрева используется трубка, свернутая спиралью и помещенная в водяную баню с температурой воды 37—38°С. Также контейнер с компонентами крови можно поставить в водяную баню или сухой инкубатор с постоянной температурой, или же замороженная плазма может быть медленно подогрета в конвенционной микроволновой печи. Лишнее тепло не нужно при подогревании компонентов крови, потому что фибриноген осаждается при температуре 50°С, а аутоагглютинация начинается при повышении температуры больше 45°С.

Если компоненты крови открыты или в контейнер уже введена игла, или они подогреты до 10°С или больше, содержимое контейнера должно быть использовано в течении 4 часов в связи с ростом бактерий. Подогретые компоненты крови не могут быть возвращены в хранилище.

Микроволновое размораживание плазмы оказывает на плазменный белок определенное воздействие, поэтому ее предпочтительнее размораживать в водяной бане.

При переливании должны использоваться соответствующие фильтры и оборудование. Фильтры необходимы для задержки кровяных сгустков и лейкоцитно-пластинчатых агрегатов, чтобы не вызвать микроцыфаркты в легких как возможное осложнение при переливании крови. Большинство переливаний крови требуют фильтра с диаметром пор 170 мм. Кровь в шприце также должна проходить через стандартный набор с соединителем Льюера.

Для больших щенков компоненты крови назначаются внутривенно через головную или яремную вены с применением постоянного катетера 20 G. Для маленьких щенков и больших котят используют катетер 22 G, который также вводят в головную или наружную яремную вену. Также маленьким щенкам и котятам можно делать переливание крови в головную и внешнюю яремную вену с использованием набора для переливания крови 23 G. Чтобы снизить вязкость при использовании маленьких игл, компоненты крови можно перемешать с 0,9%-ным раствором NaCI перед или во время переливания. Использование других растворов не рекомендуется. Гипотермичным, дегидратированным щенкам и котятам младше 3 месяцев, которым часто невозможно внутривенное вливание, переливание крови можно осуществлять внутрикостно. Поглощение перелитых компонентов крови происходит очень быстро — примерно 95% за 5 минут.

Перед переливанием должны быть получены все показатели состояния организма — вес тела, температура, пульс, дыхательная частота, цвет слизистых оболочек, общий объем кровяных клеток и концентрация плазменного белка. Начальная скорость при переливании должна составлять 0,25 мл/кг веса тела в течении 30 минут, когда за реципиентом нужно внимательно наблюдать для получения реакции на переливание крови. Благодаря малой начальной скорости переливания, в кровь реципиента проникнет минимальное количество несовместимых компонентов, но их будет достаточно для явной реакции на чужую кровь. Если в течении первых 30 минут никаких проблем не возникло, скорость переливания повышают. Но эта практика не применяется для кошек с кровью группы В, потому что даже 1 мл крови группы А может вызвать смерть. У кошек, породы которых имеют кровь группы В, обязательно должна быть определена группа крови.

Требуемый объем крови обычно переливается за 3 — 4 часа. Это правило достаточно гибко, потому что скорость переливания зависит от физических условий и гидратационного состояния реципиента. Для гиповолемичного реципиента возможна скорость выше 22 мл/кг в час. Перегруженность сосудистой системы, постоянная проблема даже у здоровых реципиентов, может быть осложнена у пациентов с сердечной и почечной недостаточностью. Щенки и котята с сердечной недостаточностью могут не выдержать скорость переливания крови, превышающую 4 мл/кг в час.

Количество необходимой цельной крови определяется просто: 2,2 мл/кг переливаемой цельной крови увеличивают общий клеточный объем на 1%, если объем переливаемой крови составляет 40%. Эритроциты (при гематокрите 60—80%) переливают так же, как и цельную кровь. Эритроциты должны быть растворены в 0,9%-ном растворе NaCI перед переливанием. Для этого в обычный 0,9%-ном раствор NaCI добавляются эритроциты в количестве 0,5—1,0 мл/мл. Количество физиологического раствора определяется по состоянию сосудистой системы и гидратационному статусу реципиента.

Если свежая, свежезамороженная и замороженная плазма назначается пациенту с сильным кровотечением для усиления свертываемости крови, то ее доза составляет 6—10 мл/кг веса тела 2—3 раза в день в течение 3—5 дней, пока кровотечение не остановится.

Осложнения при переливании крови

Хотя осложнения при переливании крови у щенков и котят достаточно редки, но все же случаются. Может быть гемолитическая реакция на несовместимые эритроциты, переливаемые реципиенту, у которого уже есть антитела изначально или они появились после первого переливания. У кошек с группой крови Б, у которых уже есть антитела на группу А, может быть очень сильная гемолитическая реакция уже при первом переливании. Большинство гемолитических реакций у щенков замедленны и проявляются в виде укорочения жизни эритроцитов после переливания и развития положительной реакции на тест Кумбса. Гемолиз также может случиться при переливании перегретых или холодных компонентов крови, параллельном назначении гипотонических растворов, механических повреждениях эритроцитов негодным оборудованием при сборе крови, хранении и переливании или при переливании под давлением через маленькую иглу или катетер, или фильтр.