Организация и методика выполнения работы. Для изучения формы микробной клетки и некоторых ее структур исследуемый вид микроба окрашивают

Для изучения формы микробной клетки и некоторых ее структур исследуемый вид микроба окрашивают.

Наиболее часто употребляемые краски: фуксин основной, (цвет раствора ярко - красный), сафрананин (цвет раствора красный), метиленовый синий (цвет раствора синий) кристаллвиолет (цвет раствора фиолетовый), малахитовая и бриллиантовая зелень (цвет раствора интенсивно зеленый), фуксин кислый (цвет раствора красный), пикрин кислый (цвет раствора интенсивно желтый).

Различают простой и сложный метод окрашивания.

При простом методе окрашивания используется один какой-нибудь красящий раствор, чаще всего фуксин Пфейффера или метиленовой синий.

ТЕХНИКА ОКРАСКИ.

На фиксированный препарат помещают пипеткой несколько капель красящего раствора так, чтобы покрыть всю поверхность мазка Фуксином Пфейффера красят 1-2 мин. метиленовым синим 3-5 мин. Затем краску смывают водой, а мазок просушивают между листочками фильтровальной бумаги или на воздухе.

Окраска по Граму.

Сложные методы окраски применяют с целью диагностики выявления отличительных структур микробов в случаях, когда последние не окрашиваются простым способом.

Сущность окраски заключается в том, что при обработке генциан -виолетом и йодом в клетках одних м.о. образуется относительно устойчивый нерастворимый комплекс. Эти м.о. относятся к грамположительным. Клетки других м.о. после обработки генциан- виолетом и йодом легко обесцвечиваются спиртом и приобретают красный цвет при последующей окраски фуксином. Их считают грамотрицательными. Способность клеток окрашиваться по Граму зависит от ряда причин и прежде всего от возраста культуры. Некоторые бактерии, будучи грамположительными в молодых культурах, в старых -неодинаково интенсивно красятся по Граму Поэт ому красить по Граму всегда следует клетки молодых (чаще всего односуточных) культур. Одновременно целесообразно окрашивать клетки контрольных м.о..отношение которых к окраске по Граму заранее известно. Мазок дня окраски по Граму. должен быть тонким, чтобы клетки равномерно распределялись на поверхности предметного стекля и не образовывали скоплений так как от толщины мазка зависят результаты окрашивания.

Окраску по Граму проводят следующим образом: На 1 обезжиренном предметном стекле готовят три мазка из разных культур В центре наносят мазок исследуемого микроорганизма. Слева и справа мазки контрольных микроорганизмов. Клетки одного из контрольных м.о. окрашивают по Граму положительно (например, одни из представителей рода Sarcina.)., а клетки другого - по Граму не окрашивают (например Esherichia colt). Мазок высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. Фиксация хим. соединениями не рекомендуется. На фиксированный мазок наливают р-р карболового генпнан-внолетя. мазок окрашивают в течении 1-2 мни. Краситель смыввают и не промывают препарат водой, обрабатывают его раствором Люголя в течении 1-2 мин. этиловым спиртом 96% для обесцвечивания.С этой целью помещают предметное стекло 2-3 раза в стакан с 96% этиловым спиртом или наливают спирт на мазок. В последнем случае мазок слегка покачивают, и спирт меняют несколько раз. Чтобы исключить излишнее обесцвечивание клеток, к спирту следует добавить йод (2 мл. 10% спиртового раствора йода на 100 мл. этанола). Препарат промывают водой и дополнительно окрашивают водным фуксином в течение 1-2 мин. Краситель сливают, препарат вновь промывают водой, высушивают и микроскопируют иммерсионной системой. При правильном окрашивании грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные - красный цвет фуксина