После перенесенного заболевания развивается стойкий напряженный антитоксический и мало выраженный антимикробный иммунитет. Возможно развитие носительства (10%) и повторное заражение (6-8%). Уровень иммунитета можно установить в РПГА. Диагностические – титры - 1:200 и выше. С той же целью применяется реакция Шика – внутрикожное введение микродоз дифтерийного токсина (1/40 Dlm 0,2 мл) внутрикожно. Через 48 ч появляется покраснение и инфильтрат, что свидетельствует об отсутствии антитоксических антител; при их наличии реакция не возникает. Из-за опасности сенсибилизации организма эту пробу проводят редко.
Микробиологическая диагностика.
Исследуемый материал – слизь из зева, носа, пленки с миндалин, раневое отделяемое, кровь
1. Бактериоскопический метод – микроскопия мазков из исследуемого материала (окраска по Граму, Нейссеру, Леффлеру).
2. Бактериологический метод – выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация. Необходимо не только выделить из исследуемого материала дифтерийную палочку, но и определить ее токсигенность.
|
|
Определение токсигенности С. dphtheriae:
а) биологическая проба на животных – внутрикожное заражение морских свинок фильтратом культуры дифтерийных бактерий – вызывает некроз в месте введения. Минимальная смертельная доза (20-30 нг) убивает морскую свинку на 4-5 день;
б) заражение куриных эмбрионов (наблюдается гибель под действием токсина);
в) внесение в культуру клеток (выявление ЦПД);
г) метод твердофазного ИФА с меченными пероксидазой антителами;
д) использование ДНК-зонда для обнаружения tox-оперона в геноме;
е) тест Илека и Оухтерлони (1948 г.) – основу составляет способность токсина и антитоксина диффундировать в агар и образовывать преципитаты (усы, стрелы) по ходу диффузии – метод двойной преципитации в геле, предварительный ответ может быть выдан через 48 часов, через 72 часа – заключение о наличии токсигенных коринебактерий, через 96 часов – окончательный ответ.
3. Серодиагностика – РПГА, ИФА, РИА, реакция ко-агглютинации, реакция Шика.
4. Экспресс – диагностика – РИФ, ИФА, РПГА, реакция ко-агглютинации.
5. Биохимический и молекулярно-биологический метод – ПЦР (обнаружение tox-гена).