Столбняк

Возбудитель _ Clostridium tetani - тонкая прямая палочка, в молодых куль­турах подвижная; споры круглые, редко овальные; спороносные формы имеют вид барабанных палочек или булавок. Капсул не образует, строгий анаэроб, по Граму окрашивается положительно, особенно в молодых культурах.

Материал для исследования: выделения из ран, кусочки пораженных тканей, взятые из глубины раны.

Исследование включает микроскопию, изучение культур и биологическую пробу.

Посевы делают в среду Китта - Тароцци, рН 7,2-7,4. Если при микроскопии в материале обнаружены посторонние бактерии, его перед высевом прогревают при 80⁰С1 ч.

Микроскопия. Наличие в мазках грамположительных палочек с круглыми концевыми спорами (в виде барабанных палочек) служит только ориентировоч­ным признаком, так как некоторые сопутствующие сапрофиты имеют сходную форму.

Бактериологическое исследование. Через 24 ч инкубация при 37⁰С столбнячная культура вызывает интенсивное помутнение бульона и издает запах жженого рога, газообразование слабое. Спустя 48-72 ч среда просветляется с выпадением осадка.

Мазки из посевов микроскопируют и при наличии чистой типичной культуры делают дробный пересев на чашки с глюкозо-кровяным агаром Цейсслера. Смешанную культуру перед пересевом прогревают при 80⁰С 20 мин или при 100⁰С 2-3 мин. Посевы выращивают при 37⁰С в анаэробных условиях.

Через 24-48 ч образует сероватые колонии с множественными отростками в виде тяжей и нитей; иногда колонии мелкие, круглые. Из характерных коло­ний делают отсев в среду Китта - Тароцци для получения чистой культуры возбудителя столбняка.

Биологическое исследование. Бульонную культуру, проверенную микроскопией на наличие сходных с возбудителем форм, выдерживают 6-10 суток при 37⁰С для накопления токсина. Культуральный бульон отсасывают и центрифу­гируют при 3000-4000 об/мин в течение 12-15 мин или фильтрую г через асбе­стовые пластинки «СФ» («EKS» или мембрану № 2) в приборе Зейтца. Центри­фугат (фильтрат) вводят по 0,3-0,5 мл двум-трем белым мышам или морским свинкам подкожно в область бедра. У животных развиваются тетанические су­дороги, и они погибают в срок от 12 ч до 5 cyтoк. Контроль: ту же дозу токсина смешивают с противостолбнячной сывороткои, выдерживают при 37⁰С 45 мин и вводят такой же группе животных. Они должны остаться живыми.

Токсин можно обнаружить и в исходном материале. После высевов его рас­тирают в ступке с двойным объемом физиологического раствора и выдерживают 1 ч в темном месте при комнатной температуре для экстрагирования токсина. Взвесь пропускают через ватно-марлевый или бумажный фильтр и вводят по 0,5-1 мл двум-трем белым мышам подкожно в область плюсны.

В положительных случаях через 2-4 дня появляются характерные для столбняка признаки: вытянутые конечности, искривление тела в сторону лапки, куда вводили токсин. Наблюдение за подопытными животными - до 10 дней. Высевы из трупов павших животных не делают.