Ботулизм

Возбудитель (C1оstridiuт botu1inuт) - толстая слабоподвижная грамполо­жительная палочка; споровые палочки имеют вид теннисной ракетки. Известно 6 типов возбудителя: А, В, С (с подтипами Са и С/3), D, Е, F. Они сходны по культуральным и морфологическим признакам, но различаются иммунобиологи­чески. Не все штаммы микроба токсигенны.

Токсины нейтрализуются только гомологичными типовыми антитоксическими сыворотками и различаются по степени чувствительности к ним животных раз­ных видов. Лошади наиболее чувствительны к токсинам В и D, меньше - к ти­пу А и мало - к С; крупный рогатый скот - к подтипу С/3 и к D, а к А и В зна­чительно устойчив; овцы - к подтипу Са И D; птицы - к подтипу С и менее ­к А и В. Во внешней среде наиболее устойчивы токсины Са и С/3.

Материал для исследования: пробы подозрительных кормов (загрязненный силос, слежавшиеся отруби и зерно, мясные и рыбные отходы и пр.); содер­жимое желудка павших крупных животных, трупы мелких животных, кровь больных.

Исследование проводят на обнаружение активного токсина и определение его типа; реже занимаются выделением токсигенных культур возбудителя.

Подготовка материала. Пробу корма или содержимого желудка массой не менее 100 г тщательно растирают в стерильной ступке с песком и перемешивают с равным или двойным объемом физиологического раствора. 2/3 пробы исполь­зуют для обнаружения токсина, остальное - для высевов.

Обнаружение токсина. Разжиженную массу выдерживают 1-2 ч при ком­натной температуре для экстрагирования токсина. Отстоявшуюся жидкость про­пускают через ватно-марлевый фильтр или центрифугируют при 3000 об/мин 20 мин. Фильтрат (центрифугат) вводят двум белым мышам массой 16-18 г внутрибрюшинно по 0,5-0,8 мл.

Цитрированную кровь или сыворотку крови больного животного без обра­ботки немедленно вводят двум белым мышам внутрибрюшинно по 0,5 мл.

Контроли: две дозы вводимого материала смешивают с равным объемом поливалентной антиботулинической сыворотки или смеси типовых сывороток А В, С и Е, выдерживают при 37⁰С 30 мин и вводят тем же способом двум белым мышам. При отсутствии антитоксических сывороток материал (кроме проб крови и сыворотки) перед введением прогревают на водяной бане при 100 ос 20 мин для ин активирования токсина и охлаждают до 30-40 ос.

Остальной фильтрат (центрифугат) в объеме не менее 15 мл хранят в плот­но закрытой пробирке в холодильнике на случай 1ипирования выявленного ток­сина.

Наблюдение за мышами ведут в течение десяти дней. В зависимости от концентрации токсина заболевание проявляется уже через несколько часов или не позднее 4 суток. Его признаки: учащенное дыхание, отказ от корма, прогрес­сирующее расслабление всех мышц, потливость, параличи конечностей и быстрое истощение.

Весьма чувствительны к токсину морские свинки. При постановке биопробы им вводят 2-3 мл фильтрата внутрибрюшинно.

Типирование токсина (реакция нейтрализации). При обнаружении токсина выясняют его тип. Опыт ставят на десяти белых мышах. В пять пробирок вно­сят по 2,4 мл полученного ранее экстракта. В четыре добавляют по 0,6 мл од­ной из антисывороток к типам А, В, С и Е, а в пятую - 0,6 мл физиологическо­го раствора (контроль). Выдерживают при 37⁰С 30 мин и каждую смесь вво­дят отдельными шприцами по 1 мл внутрибрюшинно двум белым мышам. На­блюдение ведут в течение четырех дней, при этом учитывают сроки проявления ботулизма в предыдущем опыте и то, что токсин введен в увеличенной дозе. Погибнуть должны все мыши, кроме получивших токсин, нейтрализованный гомологичной антисывороткой.

Бактериологическое исследование. Взвесь размельченного материала высевa­ют по 10 мл В две колбы (флакона) со 100 мл среды Китта - Тароцци. Одну колбу прогревают при 80⁰ С 20 мин для инактивации неспоровых бактерий. Вы севь! инкубируют при 37⁰С, а при подозрении на типы Е и F - при 28-30⁰С.

С началом роста возбудителя, через 2-3 дня, среда мутнеет, издает запах прогорклого масла, образуются газы. В мазках из мутного бульона или из осад­ка под микроскопом видны грамположительные палочки с крупными овальными концевыми спорами.

При положительных результатах микроскопии часть культуры прогревают при 80⁰С 20 мин, дробно высевают в чашки с ага ром Цейсслера и выращивают в вакууме при остаточном давлении 5-6 мм ртутного столба. Колонии возбуди­теля имеют неправильную форму, гладкую или зернистую поверхность, окруже­ны зоной гемолиза.

Важно выяснить токсигенность выделенного микроба. Для этого делают от­севы колоний в среду Китта - Тароцци и инкубируют 7-8 суток. Полученную культуру фильтруют или центрифугируют и используют для заражения лабо­раторных животных, как при выявлении токсинов в материале и их типировании.