Инфекционная энтеротоксемия овец

Возбудитель (Сlоstridium perfringens) - крупная грамположительная спорообразующая неподвижная палочка. В оргазме Сl. perfringens типа А образует капсулу. По способности вырабатывать токсины различают типы А, В, С, D, Е и F, обладающие патогенной адаптацией к животным. У овец болезнь вызывают Сl. perfringens типов С и D, у телят - А и Е, у поросят - С и реже В, у жеребят – В,D и С, у пушных зверей - А, Е и F, у верблюдов- В.

Материал для исследования. Пораженные части кишечника с содержимым органы (перевязанные), паренхиматозные органы (обязательно почка), экссудат из брюшной полости, подкожная и мышечная отечная жидкость, трубчатая кость или труп целиком; все в свежем виде.

Исследование проводят путем обнаружения токсинов в содержимом тонкого отдела кишечника и выделения чистой культуры возбудителя с последующим типированием.

Посевы делают из содержимого тонкого отдела кишечника и паренхиматоз­ных органов в среду Китта - Тароцци, МПБ и МПА. Возбудитель растет бурно, и это используют для выделения чистой культуры следующим образом: пересевы делают через 2-3 ч, при появлении мути и газов. После 3-5 пересевов в течение суток культуру высевают в чашки с глюкозо-кровяным агаром. Чтобы сократить число пересевов, поступают так: среду Китта – Тароцци, после первичного посева прогревают в водяной бане при б5⁰С 10 мин и инкубируют при 37⁰С 16-18 ч, после чего делают мазки из культуры, окрашивают по Муромцеву и микроскопируют, а затем делают пересев на глюкозо-кровяной агар Цейслера и инкубируют в анаэробных условиях при 37⁰С.

Характерныe колонии с агара отсевают в среду Китта - Тароцци. Полученную 16-18 часовую чистую культуру используют для определения наличия ток­сина и пересевают в молоко. При наличии токсина ставят реакцию нейтрализа­ции и при необходимости проворят активацию токсина (см. ниже). Возбудитель образует в молоке характерный губчатый сверток с полным просветлением сыворотки.

Микроскопия. Мазки из органов окрашивают по Граму или капсулы по Муромцеву.

Биологическое исследование весьма важно ври диагностике заболевания и типировании возбудителя. Проводится сразу после посевов.

Определение наличия токсина: содержимое тонкой кишки осо­бенно из пораженных участков ее подвздошной части, разводят в ступке 1:1 или 1: 2 (в зависимости от густоты) физиологическим раствором встряхивают дают отстояться 1 ч в темном месте, пропускают через ватно-марлевый фильтр и центрифугируют при 3000-5000 об/мин 20 мин. Центрифугатом заражают кролика массой 1,8-2 кг в ушную вену в дозе 1-1,5 мл или двух белых мышей массой 16-18 г внутрибрюшинно или в хвостовую вену по 0,5 мл Остаток жидкости не менее 5 мл хранят при 2-4⁰С. В положительных случаях животные гибнут в течение 12 ч. Срок наблюдения 24 ч. При гибели позднее 12 ч из трупов делают посевы.

Для определения токсичности выделенного штамма Сl. реrfringеns используют его 8-16 часовую культуру, выращенную в среде Китта - Тароцци с 0,5% глюкозы. Биопробу ставят на белых мышах, как описано выше. При подозрении на наличие токсинов типов D и Е, которые в культурах неактивных их активируют. Для этого культуру подщелачивают до у рН 8,0-8,2 10% раствором едкого натра (рН контролируют реактивной бумажкой), добавляют 0,25% трипсина (25 мг на 10 мл среды) или 0,5% панкреатина (50 мг на 10 мл среды) и выдерживают 2 ч при 37⁰С, после чего ставят биопробу на белых мышах.

Реакция нейтрализации. Ее ставят после обнаружения токсина в содержимом кишечника или в культуре для определения его типа.

Ход исследования. Центрифугат содержимого кишечника или 8­-16 часовую культуру разливают в пять пробирок по 1 мл. В четыре пробирки прибавляют по 1 мл одной из антитоксических сывороток А, С, D, Е, разведенным физиологическим раствором до содержания 10 антитоксических единиц (АЕ) в 1 мл, а в пятую -1 мл физиологического раствора. Пробирки встряхивают и выдерживают при 37⁰С 30 мин.

Содержимое каждой пробирки вводят отдельными шприцами внутривенно или внутрибрюшинно по 0,5 мл двум белым мышам или по 0,2 мл морским свинкам или кроликам внутрикожно в область бока, ближе позвоночнику.

В этом месте накануне выстригают шерсть. Контроль: животным вводят испытуемым материал без сыворотки. Наблюдение ведут в течение 48 ч.

Для типирования токсинов типов D и Е в культуральной жидкости ее перед смешиванием с сыворотками подщелачивают и обрабатывают панкреатином илитрипсином так же, как и при обнаружении токсина.

При обнаружении в содержимом кишечника овец токсинов возбудителя типов С и D выделять его культуру необязательно.