Лептоспиро3

Возбудитель лептоспироза относятся к роду Leptospira, в котором насчиты­вают 18 серогрупп и свыше 130 серовариантов. В ветеринарии наибольшее зна­чение имеют группы помона, тарассови, гебдомадис, гриппотифоза, иктерогемор­рагие, каникола, батавие. У крупного рогатого скота болезнь чаще вызывают Лептоспиры помона и гебдомадис, у свиней - помона и тарассови.

Лептоспиры имеют форму тонких пирально завитых нитей, подвижны могут, проходить через асбестовые фильтры «СФ».

Материал для диагностики: прижизненной - нативная или цитрированная кровь, моча, околоплодные воды; посмертной - трупы мелких животных, от трупов крупных животных - кусочки паренхиматозных органов, сердце, почки, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь, спинномозговая жидкость. Патологический материал должен быть взят и обработан в течение 6 ч в летнее время и 10-12 ч при условии хранения в охлажденном состоянии.

Диагностка проводится микроскопически бактериологически и биологически.

Подготовка материалов к исследованию..

Моча. Если в ней много посторонних частиц, ее предварительно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, после чего надосадочную жидкость собирают и вновь центрифугируют при 10000-15000 об/мин в течение 30 мин. Если нативная моча прозрачна и без посторонних частиц, ее сразу центрифуги­руют при этом режиме. Прозрачный надосадочный слой удаляют, а из нижнего слоя центрифугата а из осадка готовят на стеклах не толще 1,1 мм 10 препара­то «раздавленная капля» для микроскопии.

Кровь: ативнстю смешивают 1:2 с 1,5%-ным раствором цитрата натрия, а также ранее цитрированную, центрифугировать при 2000-3000 об/мин 5 мин или отстаивают 1 ч, из надосадочного слоя делают 10 препаратов «раздавленная капля». Целесообразно полученную надосадочную жидкость центрифугировать при 10 000 -15 000 об/мин 30 мин и готовить препараты из осадка.

Транссудаты: из грудной и брюшной полостей, околосердечную жидкость, содержимое желудка плода и другие жидкие субстраты обрабатывают так же, как мочу, и готовят препараты (10) для микроскопии.

Органы. Кусочки массой 2-3 г, из каждого органа отдельно, растирают в ступке с 5-7 мл питательной среды, физиологического раствора или стерильной воды до гомогенного состояния. Отстаивают в холодильнике при 1-2⁰С и центрифугируют при 3000 об/мин 10 мин. Препараты «раздавленная капля» гото­вят из надосадочного слоя, по три из каждого органа.

Микроскопия. Ее проводят с помощью осветителя ОИ-13 или ОИ-19, кон­денсора темного поля, на фронтальную линзу которого наносят каплю дистилли­рованной воды, и при увеличении 40 Х 7 или 40 Х 10.

Посевы. Кровь из сердца и содержимое желудка абортированного плода высевают по 3-5 капель в 3-5 пробирок с питательной средой; ликвор, осадки мочи и полостных транссудатов после центрифугирования и пригoтовления пре­паратов для микроскопии, а также другие жидкие биологические субстраты засевают по 1-3 капли в 3-5 пробирок.

Почку освобождают от капсулы и прижигают шпателем. Пастеровскую пи­петку вводят в корковый слой параллельно поверхности органа. Высевы из почки крупного рогатого скота делают из трех долеи, а из почки свиньи - из трех ее участков.

Посевы инкубируют при 26-28⁰С до трех месяцев.

Размножение лептоспир начинается через 7-20 дней, иногда через 1-2 ме­сяца. Среда при этом не изменяется, и наличие роста определяют темнопольной микроскопией «раздавленных капель», которые готовят через 3, 5, 7, 10 дней и далее через каждые пять дней из всех пробирок. При обнаружении роста делают пересев в 3-5 пробирок со свежей средой.

Для очистки лептоспир от посторонних микробов при первом способе вводят внутрибрюшинно морской свинке или крольчонку 1-2 мл загрязненной культу­ры, а белым мышам - по 0,5 мл. Спустя 30-60 мин из сердца животного берут кровь и высемют в ряд пробирок с питательной средой. Второй способ: 100 мл питательной среды с загрязненной культурой фильтруют в течение часа через асбестовый фильтр «СФ» или, лучше, «ЕКS». При этом часть лептоспир проходит в фильтрат. Его высевают в 5-10 пробирок с питательной средой, инкубируют и исследуют на наличие роста, как указано выше.

Чистые культуры лептоспир для их сохранения пересевают через 7-15 дней. Серологическое исследование. Выделенные чистые культуры лептоспир иден­тифицируют с помощью агглютинирующих групповых сывороток: помона, гебдо­мадис, тарассови, каникола, иктерогеморрагие, батавие, закске6инг. Для реакции микроагглютинации и лизиса (РМАЛ) все сыворотки разводят от 1:50 до 1:64 000 по следующей схеме:

Сыворотка, мл	Физиологический раствор, мл	Получаемое развидение сыворотки
Исходя 00,5	2,45	1:50
1:50 0,2	1,8	1:500
1:500 1,0	1,0	1:1000
1:1000 1,0	1,0	1:2000
1:2000 1,0	1,0	1:4000
1:4000 1,0	1,0	1:8000
1:8000 1,0	1,0	1:16000
1:16000 1,0	1,0	1:32000
1:32000 1,0	1,0	1:64000

Постановка реакции. Для каждой испытуемой культуры готовят 7 рядов по 9 проб ирок - по числу диагностических сывороток и их разведений. В каждый ряд вносят отдельной пипеткой по 0,1 мл сыворотки, начиная с выс­шего разведения. Таким же порядком во все ряды вносят по 0,1 мл 5-15-днев­ной культуры лептоспир без признаков агглютинации и лизиса, содержащей 70­-100 лептоспир в поле зрения микроскопа. При этом фактические разведения сы­вороток в реакции увеличиваются вдвое. После перемешивания компонентов лробирки выдерживают 2 ч при 37 ос, готовят препараты «раздавленная капля» и микроскопируют с применением конденсора темного поля.

При подготовке препаратов из одного ряда пробирок пользуются одной пас­теровской пипеткой с резиновой грушей, начиная с высшего разведения сыво­ротки. После нанесения небольшой капли на стекло пипетку опускают в ту же пробирку. Каплю накрывают покровным стеклом, немедленно микроскопируют при увеличении 40Х7 или 40Х10. Пипетку приподнимают, продувают грушей и берут жидкость со дна очередной пробирки.

При соответствующем навыке читать реакцию можно без покровного стекла при увеличении 20Х10 или 20Х15. На одно стекло наносят 8-10 небольших капелек и следят, чтобы капли не сливались, а объектив их не касался.

Учет РМАЛ: + + + + - полный лизис и агглютинация при отсутствии свободных лептоспир; + + + - реакция хорошо выражена, свободны единичные лептоспиры; + + - одна половина лептоспинр лизирована и агглютинирована, другая не реагировала; (+) - агглютинаты единичны, основная масса лептоспир не изменена; (-) - РМАЛ отсутствует.

Биологическое исследование - более чувствительный метод в сравнении с \ посевами. Для биопробы используют золотистых хомяков 20-30-дневного 203­. раста и lG--20-днеВjiЫХ крольчат-сосунов. Цель исследования - выделение I культур лептоспир из патологического материала и объектов,внешней среды, окраска культур, определение их уирулентности и дифференциация от непато:fRHbIX форм.

. 3 ающи· ате иал - к овь, мочу (вз'весь осадка после цеЫТРИфУГИf!Оlla­ния), суспензию из паренхиматозных органов павших (убитых) ЖИВОТНI\lХ WlИ

абортированного плода, сперму - вводят внутрибрюшинно двум хомяка'м по 0,3-0,5 или 1 ил или,l{вуи крольчатам по 2-3 мл. Одно животное убllвают на 4-5-й день, а другое (если не погrrбает) -на 14-16-й день ПОСле за.,аженв-я. Высевы от убитых или павших звер.ков делают из сердца, печени, ПО'Пi:И; нз каждого органа в 2-3 пробирки с питательной средой. го исследуют в РМАЛ, начиная

Кровь убитого через 14-16 ДHИр;п положительная РМАЛ свиде тсльствует о наличии лептоспир в мате~~~л~икроскопии готовят из второй почки

с разведения 1: 10 с лептоспирами.

Препараты «раздавленная капля» брюшной полостей и околосердечнои

куска печени, транссудатов из груд~~и~.

сумlCИ И из содержимОГО моче::~ь П~~IД~л~нных культур лептоспир проверяют на

Патогенность и внрулент ыше казанного возраста. С этои целью

пяти хомячках иди пяти крольча~ ах 7-~невJой культурой, содержащей 70-

их заражают внутрибрюшинно па возах 0,1; 0,2; 0,4; 0,5; 1 мл.

100 лептоспир в поле зрения микрооко едоп;щения рассеивания инфекта соблю-

С целью личной профилактики и н с отк ытым заразным материалом: высе­дают особую осторожность при работе оскЕпии центрифугировании (выполня­вах, приготовлении прешаратов для МИ~~выми п' обками), постановке РМАЛ и ют только в пробирках, закрытых КОЬ'I'работан!ые стекла пробирки, пипетки, микроскопии без ПОК!РОВ1~~I_Х c::eK~~;BOP со.1ЯНОЙ кислоты, ~атологический мате-

и прочее погружают в 10 ныи Р

риал кипятят или автоклавируют.