Методы определения вирулентности бактерий и активности бактериальных токсинов на экспериментальных животных

Экспериментальное заражение животных. Инфек­ционный процесс может быть искусственно воспроизведен пу­тем заражения лабораторных животных: кроликов, морских свинок, белых мышей, белых крыс и др. Это производится для изучения патогенности и вирулентности микроорганизмов, вы­деления чистой культуры возбудителя из различных материалов (метод биопробы), воспроизведения экспериментальной ин­фекции и других целей.

Заражают животных накожно, внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутривенно, внутрибрюшинно, перорально, интраназально, интратрахеально и интрацеребрально. Все ма­нипуляции осуществляют с помощью стерильных инструмен­тов. Перед началом опыта животных отбирают, взвешивают и маркируют. Мышь берут за хвост, опускают на стол, туловище быстро прижимают к столу двумя пальцами и, скользя ими по спине, захватывают кожу над головой и фиксируют животное в левой руке в растянутом положении. Взвесь микроорганиз­мов определенной концентрации набирают в шприц через иг­лу. Шприц держат как писчее перо в правой руке. При под­кожном заражении иглой прокалывают кожную складку на спине или у корня хвоста и медленно вводят содержимое шприца под кожу. Затем иглу быстро извлекают, прикрыв место инъекции ватой, смоченной спиртом. При внутрибрю-шинном заражении животное фиксируют головой вниз, чтобы кишечник переместился к диафрагме. В левой нижней трети живота делают прокол кожи, удерживая иглу под острым уг-

Рис.9.1.1. Дермонекротическая проба, а — отрицательная реакция; б — положительная реакция.

лом, затем переводят шприц в положение, перпендикулярное к брюшной стенке, толчкообразным движением прокалывают брюшину и вводят содержимое шприца.

Дермонекротическая проба. Кролику внутрикожно вводят 0,2 мл бульонной испытуемой культуры туберкулино­вым шприцом с тонкой иглой. В положительном случае через 2—3 сут на месте введения образуется очаг некроза (рис. 9.1.1).

Кератоконъюнктивальная проба (Шереня). Суточ­ную агаровую культуру бактерий стандартной петлей диамет­ром 5 мм вводят под нижнее веко глаза морской свинки. Через 2—4 сут оценивают выраженность кератоконъюнктивита по наличию помутнения роговицы, нагноения и изъязвления.

Определение летальной дозы микробных токси­нов. Оценивают количество токсина, вызывающеее гибель 50 % животных, которым вводилось данное вещество. С этой целью готовят ряд десятикратных разведений и вводят отдельным груп­пам животных. Через определенный срок отмечают число погиб­ших в каждой группе животных и производят расчет LD$q.

Бактериологическое исследование трупов живот­ных. Для обнаружения микроорганизмов, вызвавших гибель животного, определения их локализации в организме и выде­ления чистой культуры возбудителя производят вскрытие за­раженного животного сразу после его гибели, соблюдая пра­вила асептики во избежание загрязнения посторонними бак­териями. Мышь помещают брюшком кверху на марле, смо­ченной дезинфицирующим раствором, поверх слоя застывшего парафина в ванночке и прикрепляют булавками за лапки. Тщательно обрабатывают кожу раствором какого-либо анти­септика. Вскрытие производят стерильными инструментами (рис. 9.1.2).

Делают продольный разрез кожи по прямой линии от ниж-

Рис.9.1.2. Вскрытие мыши, а—г — этапы вскрытия.

ней челюсти до лобка, осторожно отсепаровывают лоскуты кожи в стороны. Отмечают состояние подкожной жировой клетчатки и лимфатических узлов, при необходимости делают из них мазки-отпечатки и посевы.

Грудную полость вскрывают поперечным разрезом под ме­чевидным отростком и двумя продольными разрезами через Ребра параллельно грудине. Откладывают вырезанный лоскут и осматривают органы грудной полости, отмечая в протоколе наличия экссудата. Для посева крови из сердца его поверхность прижигают раскаленным кончиком пинцета и вводят капилляр стерильной пипетки в полость сердца. Затем каплю крови из

пипетки выдувают в пробирку со средой. Из ткани легких готовят мазки-отпечатки и делают посевы.

Брюшную полость вскрывают продольным разрезом брю­шины ножницами, не задевая кишечник. Осматривают органы брюшной полости, отмечая в протоколе наличие экссудата, величину, цвет и консистенцию печени, селезенки, надпочеч­ников, брыжеечных лимфатических узлов. При необходимости делают посевы из этих органов на питательные среды.

Для приготовления мазков-отпечатков вырезают из печени, селезенки, почек небольшие кусочки ткани, берут их пинцетом и прикасаются к предметному стеклу поверхностью разреза. Мазки-отпечатки фиксируют в жидком фиксаторе и окраши­вают метиленовым синим. При микроскопии отмечают при­сутствие микроба-возбудителя в различных органах и тканях. Результаты посевов учитывают на следующий день после ин­кубации в термостате. Данные вскрытия трупа протоколируют. Труп животного после вскрытия подлежит уничтожению.