2015-06-11
371
Двух лягушек обездвиживают, фиксируют на дощечке на спине. Вскрывают грудную полость и обнажают сердце. В левую дугу аорты ввязывают канюлю и заполняют ее раствором Рингера с гепарином, другую дугу аорты перевязывают. Для обеспечения перфузии перерезают брюшную вену. Затем лягушек вместе с дощечками взвешивают, укрепляют в лапках штативов; канюли соединяют с перфузионными системами, одна из которых заполнена раствором Рингера, другая - лошадиной сывороткой.
Открывают зажимы на перфузионных системах и регулируют ток жидкости так, чтобы первоначальная скорость ее вытекания была одинаковой. Перфузию лягушек проводят в течение 30-40 мин. Затем, вынув дощечки с лягушками из зажимов и удалив свободную жидкость, лягушек снова взвешивают; отмечают отечность и значительное увеличение веса лягушки, которую перфузировали раствором Рингера.
Реакция бласттрансформации лимфоцитов
Бласттрансформация лимфоцитов - фактически, это размножение делением лимфоцитов в результате контакта с антигеном или аллергеном.
Для постановки реакции бласттрансформации in vitro у больного в асептических условиях берут 5-10 мл крови в пробирку, содержащую 100-200 ЕД гепарина, осторожно перемешивают и помещают на 60 мин в термостат при температуре 37°С для осаждения эритроцитов. После инкубации надосадочный слой плазмы отсасывают в стерильную пробирку. Определяют число лимфоцитов в 1 мкл.
Затем взвесь лимфоцитов разводят питательной средой 199 таким образом, чтобы в 1 мл содержался 1-2 млн лимфоцитов. Приготовленную лимфоцитарную взвесь разливают в стерильные флаконы по 1 мл, добавляют 0,1 мл предварительно оттитрованного аллергена. Флаконы закрывают пробирками и помещают в термостат при температуре 37°С на 72 часа.
Затем готовят мазки, фиксируют и окрашивают по Романовскому. Интенсивность бласттрансформации оценивается путем подсчета бластных клеток на 1000 клеток и определения их процентного содержания.
Реакция оценивается как положительная, если число бластных форм не менее 4% от общего числа культивируемых клеток; максимальное число бластных клеток при действии специфического аллергена может достигать 35%.
