2015-06-14
1615
1.1.Общие указания. Следует сочетать с анализом исследуемого образца:
а) отрицательный контрольный реактив, т.е. соответствующий образец, о котором известно, что он не содержит конкретного соединения (соединений); при анализе мочи должен использоваться контрольный (не содержащий данного соединения) образец мочи либо вода;
б) известный положительный образец соответствующей концентрации. Для анализа следует использовать мочу или воду с добавкой (отрицательный контрольный образец мочи, в который добавлено известное количество данного соединения).
Качественные тесты основаны на простых цветовых реакциях и предназначены для выявления ряда имеющих большое значение лекарственных средств и других ядовитых веществ. Полное описание этих тестов дается в соответствующих разделах вместе с подробной информацией о распространенных источниках помех и данными о пороговой чувствительности тестов. Из числа описанных анализов тест на салицилаты, например, на ацетилсалициловую кислоту (аспирин) (тест Триндера, известный также как тест с хлоридом железа), лучше всего выполняется на образцах мочи и хуже — на содержимом желудка или остатках веществ с места происшествия, так как ацетилсалициловая кислота сама по себе не вступает в реакцию без предварительного гидролиза. Большинство других тестов можно проводить на всех указанных образцах
Можно использовать иммунохроматографические пробы с помощью экспресс-тестов для скрининга (отсеивания) химических соединений, имеющих химико-токсикологическое значение. Отрицательный результат испытаний с помощью экспресс-тестов даёт право делать вывод об осуствии факта приёма того или иного средства в течение ближайших суток до смерти.
1.2.Рекомендуемые качественные цветовые тесты
1.2.1. Салициловая кислота (включая ацетилсалициловую кислоту (аспирин)) — тест Триндера Предпринимается для исследования мочи, содержимого желудка и остатков веществ с места происшествия.
Реактив. Реактив Триндера. Смешать 40 г хлорида ртути, растворенного в 850мл очищенной воды, с 120 мл водной соляной кислоты (1 моль/л) и 40 г гидратированного нитрата железа и разбавить до 1 л очищенной водой.
Метод: Добавить 0,1 мл реактива Триндера к 2 мл мочи и перемешивать втечение 5 с.Для анализа содержимого желудка или остатков веществ с места происшествия на ацетилсалициловую кислоту или метилсалицилат, а также мочи, содержимого желудка или остатков веществ с места происшествия на салициламид сначала прокипятить 1 мл образца с 1 мл водной соляной кислоты(0,1 моль/л) в течение 10 мин, охладить, отфильтровать (если необходимо) изатем нейтрализовать, добавив 1 мл водного раствора гидроксида натрия (0,1моль/л).
Оценка результата. Интенсивный фиолетовый цвет свидетельствует о присутствии салицилатов. В этом месте активную реакцию дают азидные консерванты, а приисследовании образцов мочи, содержащих высокие концентрации кетонов(кетонные тела), могут быть получены слабые ложноположительные реакции.
Этот тест чувствителен и позволяет обнаружить терапевтические дозысалициловой кислоты, ацетилсалициловой кислоты, 4-аминосалициловой кислоты, метилсалицилата и салициламида.
Чувствительность Салицилат, 10 мг/л.
1.2.3. Фенотиазины — тест с FPN. Добавить 1 мл реактива FPN (смесь 5 мл водного раствора хлоридажелеза (50 г/л), 45 мл водной перхлорной кислоты(200 г/кг) и 50 млводной азотной кислоты (500 мл/л)) к 1 мл образца и перемешивать втечение 5 с.
Оценка результата. Цвета от розового до красного, оранжевый, фиолетовыйили синий свидетельствуют о присутствии фенотиазинов.
Положительные результаты должны быть подтверждены с помощью тонкослойной хроматографии.
1.2.4. Парацетамол, фенацетин — о-крезоламмиачный тест. Добавить 0,5 мл концентрированной соляной кислоты к 0,5 мл образца, нагреть в кипящей водяной бане в течение 10 мин и охладить. Добавить 1 мл водного раствора о-крезола (10 г/л) к 0,2 мл гидролизата,добавить 2 мл раствора гидроксида аммиака (4 моль/л) и перемешивать в течение 5с. Мгновенное интенсивное окрашивание в синий илисине-черный цвет свидетельствует о присутствии парацетамола илифенацетина.
Оценка результата. Мгновенное интенсивное окрашивание в синий илисине-черный цвет свидетельствует о присутствии парацетамола илифенацетина.
1.2.5. Для обнаружения барбитуратов: В делительную воронку вносят 50 мл мочи, к которой по каплям прибавляют 10 %-й раствор серной кислоты до рН = 4...5 и 50 мл диэтилового эфира. Содержимое делительной воронки взбалтывают. После разделения фаз отделяют эфирную вытяжку. Водную фазу еще раз взбалтывают с 50 мл диэтилового эфира.
Эфирные вытяжки соединяют и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл хлороформа. К хлороформному раствору прибавляют 2 капли свежеприготовленного 1 %-го раствора ацетата кобальта в метиловом спирте и несколько капель свежеприготовленного 1 %-го раствора гидроксида лития в метиловом спирте. После прибавления каждой капли указанных реактивов жидкость взбалтывают. Появление голубой окраски указывает на наличие барбитуратов в моче.
1.2.6. Тест на присутствие эфедрина и эфедрона: К 1 мл мочи добавляют кристаллический сульфат натрия до насыщения (кристаллы, выпавшие в осадок не растворяются при встряхивании в течение 30 сек) и, затем, по 0,5 мл сероуглерода в бензоле (5% раствор) и аммиаката меди, встряхивать 30 минут. В этих условиях, эфедрин и эфедрон образуют комплексное соединение с медью, содержащееся в верхнем органическом слое. Органическую фазу отбирают, а водную промывают 1 мл бензола. Объединённые органические экстракты упаривают в токе холодного воздуха до объёма 50-100 мкл. Упаренный экстракт количественно наносят полосой 3 см на линию старта пластинки «Силуфол-254 УФ».
Приготовление аммиаката меди. Раствор А- растворить 20 г ацетата аммония и 0,5 г сульфата меди в 30 мл воды. Раствор Б- 10г едкого натра растворить в 20 мл воды и добавить 20 мл 25% раствора аммиак. Прибавлять к раствору А растворБ и довести общий объём водой до 100мл.
Хроматографирование проводят в системе хлороформ-ацетон (48:2)- для эфедрина и в системе циклогексан:ацетон:метанол (40:10:2) – для эфедрона, Rf для эфедрина 0,26, для эфедрона 0,27, при длине пробега растворителя 10 и 15 см соотвественно. Пластинку просушивают и просматривают в УФ свете.
Оценка результатов. Желто-коричневое окрашивание и совпадение величин Rf служит положительной реакцией и основанием для проведения дополнительного исследования. При отрицательном результате на эфедрин и эфедрон дальнейшее исследование на их обнаружение не проводится.
1.2.7. Проба на наличие хинина в моче. В делительную воронку вносят 2 мл мочи, которую подщелачивают раствором аммиака, а затем прибавляют 4 мл хлороформа и взбалтывают в течение 5 мин. От водной фазы отделяют слой органического растворителя, который взбалтывают с 3 мл 10 %-го раствора серной кислоты. Синяя флуоресценция водной фазы указывает на наличие хинина в моче. Флуоресценция становится более выраженной, если кислую водную вытяжку облучать УФ-светом.
1.2.8. Предварительная проба на наличие кодеина в моче. В делительную воронку вносят 50 мл мочи, подщелачивают раствором аммиака до рН=10, прибавляют 50 мл хлороформа и взбалтывают в течение 5 мин. Хлороформную вытяжку отделяют от водной фазы, вытяжку взбалтывают с 3 мл воды в течение 3 мин. Водную фазу отделяют от хлороформа, фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл этилового спирта. Полученный спиртовой раствор используют для обнаружения кодеина одним из следующих способов:
а) на фильтровальную бумагу наносят каплю полученного спиртового раствора и прибавляют каплю реактива Марки. При наличии кодеина пятно приобретает красноватую окраску, переходящую в сине-фиолетовую;
б) на фильтровальную бумагу наносят каплю указанного выше спиртового раствора и прибавляют каплю 0,5%-го раствора ванадата аммония и каплю 2 %-го раствора серной кислоты. При наличии кодеина появляется зеленая окраска, переходящая в синюю.
Для подтверждения результатов указанных реакций необходимо произвести обнаружение кодеина в вытяжке методом хроматографии в тонком слое сорбента.
