Метод изолирования токсических веществ подкисленным этиловым спиртом, является эффективным для выделения ядовитых соединений из гнилостного биологического материала.
2.1.1. Метод Стасса-Отто. Ход изолирования. 100 г тщательно измельченного биологического материала вносят в широкогорлую колбу вместимостью 500 мл, заливают этиловым (96°) спиртом до покрытия им твердых частиц исследуемого объекта. Смесь биологического материала и этилового спирта подкисляют 10 %-м спиртовым раствором щавелевой кислоты. Содержимое колбы периодически перемешивают стеклянной палочкой. Через некоторое время проверяют рН содержимого колбы и при необходимости прибавляют 10 %-й спиртовой раствор щавелевой кислоты до рН = 2...3. Колбу слегка закрывают пробкой, оставляют на сутки в теплом месте (25—30 °С) при периодическом перемешивании ее содержимого. После этого кислую спиртовую вытяжку сливают с биологического материала. Настаивание биологического материала с новыми порциями этилового спирта, подкисленного 10%-м раствором щавелевой кислоты до рН = 2...3, производят еще 3 раза (в течение суток каждый раз). Кислые спиртовые вытяжки из биологического материала соединяют и переносят в фарфоровую чашку. Биологический материал переносят на фильтр и промывают этиловым спиртом. Этиловый спирт, которым промывают биологический материал, присоединяют к полученным вытяжкам. Объединенные спиртовые вытяжки упаривают до густоты сиропа на водяной бане, нагретой до 40 °С. К сиропообразной жидкости при перемешивании стеклянной палочкой по каплям прибавляют этиловый спирт (96°) до прекращения выпадания примесей в осадок. Образовавшийся осадок отфильтровывают, фильтр промывают этиловым спиртом. Фильтрат снова упаривают на водяной бане до густоты сиропа, как указано выше. Из сиропообразного остатка примеси осаждают этиловым спиртом. Упаривание спиртовых фильтратов и осаждение примесей этиловым спиртом из сиропообразной жидкости проводят многократно (до прекращения осаждения примесей от прибавления этилового спирта).
|
|
К очищенной таким образом сиропообразной жидкости прибавляют 25 мл воды. Если при этом образуется осадок, его отфильтровывают.
Кислую водно-спиртовую жидкость переносят в делительную воронку, прибавляют 15 мл хлороформа и легко взбалтывают в течение 5 мин, а затем отделяют хлороформную вытяжку. Кислую водно-спиртовую жидкость еще 2—3 раза взбалтывают с новыми порциями хлороформа (по 15 мл). Хлороформные вытяжки из кислой водно-спиртовой жидкости соединяют, доводят до точного объёма в мерных колбах и исследуют на наличие ядовитых соединений, экстрагирующихся органическими растворителями из кислой среды. Оставшуюся в делительной воронке кислую жидкость подщелачивают 25 %-м раствором аммиака до рН = 9...10. Из этой подщелоченной жидкости алкалоиды и другие токсические вещества 4 раза экстрагируют новыми порциями хлороформа (по 15 мл). Хлороформные вытяжки соединяют доводят до точного объёма в мерных колбах и исследуют на наличие алкалоидов и некоторых других токсических веществ основного характера.
|
|
2.1.2. Методика изолирования рекомендуемая при определении веществ группы фенотиазина. 100г ткани внутренних органов измельчают, заливают 96градусным этиловым спиртом до покрытия им твердых частиц объектов. Смесь подкисляют 10% спиртовым раствором щавелевой кислоты до реакции среды 2-3 и оставляют на 15 минут, при периодическом перемешивании. Затем проверяют кислотность смесей и оставляют на два часа при периодическом перемешивании. По истечении времени спиртовые вытяжки сливают, и биологический материал вновь заливают новой порцией подкисленного спирта и оставляют еще на два часа. Настаивание с новыми порциям подкисленного спирта, проводят еще два раза. Вытяжки фильтруют и фильтраты, из каждого объекта отдельно, выпаривают на водяной бане(40град.С) до густоты сиропа. Упаривание и обработку сиропа спиртом проводят до прекращения выпадения осадка, после прибавления к сиропу, по каплям, спирта. Освобожденные от примесей спиртовые втяжки выпаривают досуха. К сухим остаткам прибавляют по 100мл воды, нагретой до 60 градС. После охлаждения растворы профильтровывают и собирают в делительную воронку. Фильтры промывают 5% спиртовым раствором кислоты щавелевой и промывные воды присоединяют к основному фильтрату. Далее проводят очистку этиловым эфиром дважды по 50мл. Кислые вытяжки подщелачивают 50% раствором едкого натра до реакции среды 12-13 и экстрагируют 4 раза этиловым эфиром по 15.10.10мл. Далее эфирные вытяжки соединяют и взбалтывают с пятью порциями 0,5М раствора серной кислоты (10.10.10.5.5). Реэкстракты собирают в мерную колбу емкостью 50мл. Колбу нагревали до 50-60град.С на водяной бане в течение 3-х мин для удаления остатков эфира. Объем реэкстракта доводят до 50мл 0,5М раствором серной кислоты в мерной колбе. 40мл реэкстракта вносят в делительную воронку и подщелачивают 50% раствором едкого натра до реакции среды 13 по универсальной индикаторной бумажке. Содержимое воронки взбалтывают с тремя порциями диэтилового эфира по 15мл. Эфирные вытяжки фильтруют через слой безводного сульфата натрия и собирают в выпарительную чашку, наполняя каждый раз чашки только на одну треть их объёма. Полученный сухой остаток, растворяют в 10мл диэтилового эфира.