Предварительная обработка образцов

Хотя многие методики изолирования могут выполняться непосредственно на биологических материалах, часто требуется та или иная форма предварительной обработки образцов. В случае плазмы и сыворотки простая форма предварительной обработки предусматривает осаждение белка вихревым перемешиванием, например с водным раствором трихлоруксусной кислоты, с последующим центрифугированием и отделением чистого супернатанта. Применяют также гидролиз некоторых соединений, в том числе конъюгированных метаболитов (сульфаты и глюкурониды), который осуществляется нагреванием с кислотой или обработкой препаратом фермента. Это позволяет либо получить способное реагировать соединение для анализов (как, например, в случае бензодиазепинов и парацетамола), либо повысить чувствительность тестов (в случае слабительных средств и морфина).

Трупный материал. Кровь: 80мл крови смешивают с 80мл концентрированной соляной кислоты и нагревают на водяной бане 1час с обратным холодильником. Затем полученную смесь охлаждают до комнатной температуры, далее как описано в п.п. 2.2.1.2., п.п. 2.2.1.3.

Трупный материал. Ткани и органы (в случае бензодиазепинов и парацетамола): 25 грамм ткани головного мозга, 25 грамм ткани желудка, 25 грамм ткани печени, 25 грамм ткани селезёнки, 25 грамм ткани почки, 25 грамм ткани тонкой кишки, 25 грамм толстой кишки и весь кожный лоскут помещают в круглодонные колбы, каждый орган отдельно, вносят двойное количество 6н. раствора соляной кислоты и проводили гидролиз на глицериновой бане с обратным холодильником при 120°С в течение часа. По окончании гидролиза холодильник промывают 5 мл 2 н. раствора соляной кислоты, промывные воды присоединяют к гидролизатам из каждого органа отдельно. Горячие гидролизаты фильтруют через ватмановский фильтр (белая лента). Остатки на фильтре трижды промывают 2 н. раствором соляной кислоты. Гидролизаты и промывные воды из каждого органа отдельно объединяют. Из полученных вытяжек проводят экстрагирование диэтиловым эфиром трижды порциями 20, 15, 15 мл. Органическую фазу из каждого органа отдельно профильтровывают через воронку с безводным сульфатом натрия. Полученные экстракты из каждого органа отдельно объединяют, доводят объемы до 50мл в мерных колбах далее как описано в п.п. 2.2.1.3.

Кровь живых лиц. Методика изолирования: 5мл крови смешивают с 8мл 40% раствора бисульфита натрия, добавляют 2мл 15% раствора соляной кислоты, смесь нагревали на кипящей водяной бане в течение 30минут, а затем охлаждают. К жидкости добавляют 3мл 50% раствора трихлоруксусной кислоты. Через 10 минут надосадочную жидкость отфильтровывают в делительную воронку, нейтрализуют раствором аммиака 25% до реакции рН 6-7 по универсальному индикатору. Жидкость насыщают кристаллическим бикарбонатом натрия (0,3г на 30мл жидкости) и экстрагируют смесью бутанол-хлороформ (1:9) три раза по 20мл, в течение 5минут каждый раз. Экстракт профильтровывают через слой безводного сульфата натрия и концентрируют.