Раствор А: 35,628 г двуметаллического фосфорнокислого натрия (Na2HPO4·12Н2О) растворяют в воде и доводят до 1 л.
Раствор Б: 21,008 г лимонной кислоты растворяют в воде и доводят до 1 л. Для получения бу-ферного раствора с рН 2,8 смешивают 1,58 мл раствора А с 8,42 мл раствора Б. Исходные растворы сохраняют в течение 1 мес.
Бромно-ртутные бумажки: из беззольной фильтровальной бумаги вырезают кружочки по размерам трубки насадки на колбочку прибора Зангера-Блека. Бумажные кружочки пропитывают 5%-ным спиртовым раствором бромной ртути, сушат на воздухе и хранят в плотно закрытой склянке из темного стекла до 6 мес.
Свинцово-ацетатная вата: гигроскопическую вату пропитывают в 5%-ном растворе уксуснокислого свинца и сушат. Хранят в плотно закрытой склянке до 1 г.
Раствор молибденовокислого аммония: 5 г молибденовокислого аммония растворяют в 100 мл воды, добавив 35 мл азотной кислоты с удельным весом 1,22 (43%-ный раствор). Срок хранения 3 мес.
Раствор уксуснокислого бензидина: 0,05 г основного бензидина растворяют в 10 мл концентрированной уксусной кислоты (80%) и доводят водой до 100 мл. Срок хранения 10 дней.
|
|
В целях ускорения токсикологических исследований при проведении лабораторной диагностики отравлений металлическими ядами (медью, ртутью, цинком, барием и свинцом) разработаны экспрессные (ускоренные) методы обнаружения этих ядов в патологическом материале и других объектах.
Для обнаружения с помощью экспрессных химических методов бария, свинца, цинка, меди и ртути (каждого в отдельности) требуется около 1 ч, включая разрушение патологического материала и других исследуемых объектов, а для исследования на фосфид цинка по фосфору и цинку — 2 ч.
Обнаружение металлических ядов — цинка, меди, бария и свинца — основано на применении метода осадочной хроматографии на бумаге. Цинк определяют по реакции с дитизоном, медь — рубеановодородной кислотой, барий и свинец — родизоновокислым натрием.
Обнаружение ртути проводят с помощью реакции с йодистой медью капельным методом на бумаге.
Метод осадочной хроматографии на бумаге позволяет обнаруживать искомый катион, находящийся в смеси с другими катионами, без выделения его в чистом виде. Присутствие других катионов в количествах, превышающих в 100 раз количество искомого катиона, не мешает его обнаружению методом осадочной хроматографии на бумаге (ртути — капельной реакцией с йодистой медью на бумаге).
Для определения цинка, меди и ртути применяют экспрессный способ неполного разрушения патологического материала концентрированной серной кислотой и пергидролем; для выделения бария и свинца применяют способ разрушения патологического материала концентрированной соляной кислотой и хлоратом калия. В обоих случаях разрушение навески (20—25 г) патологического материала для получения минерализата проводят за 30—40 мин.
|
|
Подготовка материала для исследования. Из патологического материала (содержимое желудка, зоба, кишечника со стенками, кусочки паренхиматозных органов, рвотные массы) отделяют 20—25 г для исследования на медь, ртуть и цинк, часть материала сохраняют для исследования на барий и свинец, на другие яды и для контроля. Если материал был консервирован спиртом или содержит много воды (рвотные массы, силос), то пробу помещают в фарфоровую чашку и подсушивают на кипящей водяной бане (для удаления избытка воды).
Для исследования на цинк, ртуть и медь разрушение материала проводят концентрированной серной кислотой и пергидролем. 20—25 г патологического материала помещают в колбу Кьельдаля объемом 250—300 мл, заливают 10—12,5 мл пергидроля, 1—2 мин перемешивают и прибавляют 6—7 мл концентрированной серной кислоты. Содержимое колбы разогревается и наступает бурная реакция. Когда реакция затихнет, колбу осторожно нагревают на электроплитке и прибавляют по 1—2 мл пергидроля до тех пор, пока содержимое колбы сделается прозрачным (полного разрушения органического материала при этом не происходит — остаются неразрушенными жир и продукты распада белков). Для разрушения 20—25 г материала требуется примерно 25—40 мин.
Для исследования на барий и свинец разрушение патологического материала проводят концентрированной соляной кислотой и хлоратом калия (бертолетовой солью), чтобы избежать образования труднорастворимых сернокислых солей бария и свинца, выпадающих в осадок. Навеску материала в 20—25 г помещают в колбу Кьельдаля, заливают концентрированной соляной кислотой, нагревают и прибавляют небольшими порциями хлорат калия, пока жидкость не станет прозрачной. Разрушение 20—25 г материала происходит в течение 30—40 мин.
Обнаружение цинка. Часть минерализата (1—2 мл) разбавляют 1:1 дистиллированной водой, берут 2—3 капли и нейтрализуют концентрированным аммиаком (по лакмусу), одну каплю нейтрализованного раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанной тиомочевиной и высушенной, и держат 1 мин над горлом склянки с концентрированным аммиаком, высушивают на воздухе и опрыскивают из пульверизатора раствором дитизона в бензоле. При наличии цинка на бумаге появляется пятно розовато-красного или красно-малинового цвета. В контрольном опыте вместо минерализата берут дистиллированную воду и проделывают все операции основного опыта. Пятно на бумаге не должно окрашиваться в розовый или красно-малиновый цвет. Нормально присутствующий в органах цинк при этих условиях не обнаруживается.
Обнаружение меди. 2—3 капли минерализата нейтрализуют концентрированным раствором аммиака, каплю нейтрализованного раствора наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанной раствором кремнекислого натрия и высушенной, держат над горлом склянки с концентрированным аммиаком, подсушивают и опрыскивают из пульверизатора раствором рубеановодородной кислоты. В присутствии меди пятно окрашивается в темно-зеленый цвет. В случае сомнительной реакции на медь с целью повышения чувствительности метода следует взять 3—5 мл минерализата и выпарить в фарфоровой или кварцевой чашке на электроплитке с добавлением нескольких капель пергидроля для обесцвечивания темнеющей жидкости и проделать реакцию на медь, как указано выше.
Обнаружение ртути. На беззольную фильтровальную бумагу наносят каплю взвеси йодистой меди, выжидают 2—3 мин и наносят на это место каплю минерализата. В присутствии ртути появляется красное или красно-оранжевое окрашивание.
|
|
Реакция высокочувствительная, ею можно обнаруживать 0,25 мкг ртути в одной капле.
Обнаружение бария. 3—5 капель минерализата нейтрализуют концентрированным аммиаком, одну каплю жидкости наносят на полоску фильтровальной бумаги, пропитанную 4%-ным раствором виннокислого натрия и высушенной, подсушивают на воздухе и опрыскивают из пульверизатора раствором родизоната натрия, а затем буферным раствором с рН 2,8. В присутствии бария пятно окрашивается в оранжево-красный цвет. Присутствие в минерализате цинка, меди, ртути и железа в 100-кратном количестве по отношению к барию не мешает его обнаружению этим методом. Для дифференциации бария от свинца на оранжево-красное пятно от родизоновокислого бария наносят каплю 10%-ного раствора сернокислого натрия, оранжево-красная окраска исчезает; если же присутствует свинец, окраска пятна не меняется.
Обнаружение свинца. Каплю горячего минерализата (при охлаждении минерализата хлористый свинец выпадает в осадок) наносят на полоску бумаги, пропитанной 4%-ным раствором виннокислого натрия и высушенной, держат над горлом склянки с раствором крепкого аммиака до полной нейтрализации соляной кислоты, подсушивают и опрыскивают из пульверизатора раствором родизоната натрия, а затем буферным раствором с рН 2,8. В присутствии свинца пятно окрашивается в фиолетовый цвет, а при незначительном количестве свинца — в красно-оранжевый.
Для дифференциации бария от свинца на оранжево-красное пятно, образовавшееся от родизоновокислого бария, наносят каплю 10%-ного раствора сульфата натрия. Оранжево-красная окраска исчезает. Если же присутствует свинец, цвет пятна не меняется.