Количественное определение нитритов в биологических объектах

Методом капиллярной газовой хроматографии.

В пенициллиновый флакон вместимостью 15 мл помещали (раздельно) по 2,0г средней пробы крови, или измельченных тканей органов (печени, желудка, легких, почки, головного мозга, тонкого кишечника), добавляли по 0,5 мл 6%о раствора этилового спирта, закрывали герметично пробкой (фиксировали к горловине), добавляли по 0,5 мл насыщенного раствора щавелевой кислоты и выдерживали 2 минуты на водяной бане при температуре 80⁰С. Газовую пробу из флакона микрошприцем, предварительно проверенным на отсутствие фонового газовыделения и предварительно подогретым до 40-50^о С, отбирали для анализа по 100мкл. Условия газохроматографического разделения: газовый хроматограф c ПИД, колонка капиллярная кварцевая HP-1(ZB-1) с метилсилоксаном, размером 30,0м х 0,32мм. Температура колонки программируемая: 40⁰С 6 минут, градиент 10град/мин, 100⁰С, 1 мин.,15 град/мин, 180⁰С,3 мин., затем кондиционирование и регенерация колонки 1 мин. при температуре 250^оС. Газ-носитель - водород, скорость газа-носителя 6,8 мл/мин., поддувочный газ – азот (гелий). Режим с делением потока, отношение потоков 1:15, температура инжектора -200⁰С. Детектор - пламенно-ионизационный, 250⁰С, Расход водорода - 30 мл/мин, воздуха - 300мл/мин. Сигнал регистрировалcя и обрабатывался компьютерной системой (Данная методика разроботана с использованием программного обеспечения "Chem Station Version А10.02") и наработанным ранее методом. Параллельно вводили стандартную смесь спиртов, и, отдельно, калибровочную смесь этилнитрита (с концентрацией стандартного раствора нитрита натрия 1мг/мл); при этом идентифицированы пики метанола, этанола, н-пропанола, изо-пропанола, н-бутанола, изобутанола, н-амилового, изоамилового спиртов, этилнитрита. Записанный метод сохраняется в памяти компьютерной системы под определенным названием и может быть вызван в любое время. Исследование на «чистых растворах» показало, что по приведенной методике обнаруживается 3,6 мкг нитрита натрия в пробе (предел обнаружения), предел определения составляет 7,5 мкг.